Tris-乙酸電泳緩沖液(50×TAE,RNase free)由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持，本品用于科研試驗，本產(chǎn)品質(zhì)量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多Tris-乙酸電泳緩沖液(50×TAE,RNase free)等核酸電泳和回收產(chǎn)品請聯(lián)系我司咨詢訂購。...

特別提示：包括Tris-乙酸電泳緩沖液(50×TAE,RNase free)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：Tris-乙酸電泳緩沖液(50×TAE,RNase free)
產(chǎn)品貨號：GL1161
產(chǎn)品規(guī)格：500ml

用途：
電泳緩沖液，常用于RNA凝膠電泳

注意事項：
主要由2MTris-1M乙酸、50mMEDTA、DEPC處理組成。

儲存條件：室溫，12個月

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名稱：一站式DNA非變性PAGE電泳套裝
貨號：BTN100205
規(guī)格：30次
本品就是專門用于非變性PAGE的試劑。非變性PAGE電泳是研究SSCP-PCR(single-strand conformation polymorphism-PCR、單鏈PCR片段構(gòu)象多態(tài)性)和凝膠滯阻(Gel Shift)的重要研究手段，因為在非變性PAGE中，DNA的遷移率除跟長短相關(guān)外，還跟其構(gòu)象和結(jié)合的蛋白質(zhì)相關(guān)。

產(chǎn)品特點：
1.一站式，用戶只需要準備水和樣品，十分方便。
2. 安全，免去了實驗人員接觸粉末狀的劇毒物品丙烯酰胺。
3. 靈活，高濃度的丙烯酰胺溶液可用于配制各種濃度的PAGE膠，分開提供的丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺可用于配制各種交聯(lián)度的PAGE膠。
4. PAGE電泳后可直接用于銀染等后續(xù)試驗。

產(chǎn)品組成：

成分	規(guī)格	保存
丙烯酰胺	60g	室溫
甲叉雙丙烯酰胺	2g	室溫
TEMED	1.5ml	4℃，避光
過硫酸銨(干粉)	1g	室溫
非變性PAGE上樣液，2×	1ml	4℃
10×TBE(BTN90313)	250ml	室溫
說明書	1份

儲存條件：常溫運輸，保存條件見上表，有效期一年。

使用方法：
用于SSCP-PCR分析的非變性PAGE電泳(其他應(yīng)用請相應(yīng)修改參數(shù))

一、PAGE濃度的選擇：zuì好使用濃度為5-12%的丙烯酰胺膠，因為SSCP-PCR的擴增長度一般在150-200bp之間，而5%的PAGE的有效分辨范圍為80-500bp、8%的PAGE的有效分辨范圍為60-400bp、12%的PAGE的有效分辨范圍為40-200bp。

二、PAGE交聯(lián)度的選擇：交聯(lián)度越低，孔徑越大，對DNA分子構(gòu)象的變化越靈敏，SSCP分辨率越高，但過低則膠太軟，不好進行電泳后的后續(xù)操作，所以一般選擇1-2%的交聯(lián)度(即丙烯酰胺：甲叉雙丙烯酰胺在49:1到48:2之間)。

三、體積的選擇：SSCP-PCR檢測需要長約30-40cm的測序膠板，可以結(jié)合梳子的厚度，計算膠的體積。
操作：
1. 配制PAGE膠(這是配制100mL膠的用量，配制更大體積的膠則需以此用量為基礎(chǔ)按比例增加)
A：新鮮配制10%的APS(過硫酸銨)：按每0.1克過硫酸銨干粉加1mL超純水的比例將水加到裝有硫酸銨干粉的1.5mL EP管中，搖晃到粉末全部溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周。
B：新鮮配制適當交聯(lián)度29:1的30%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液(AB溶液，下同)：在本產(chǎn)品提供的裝有60 g丙烯酰胺干粉的塑料瓶中加入146mL自備的去離子水和全部的甲叉雙丙烯酰胺，充分搖晃直到溶解(約需10-20分鐘)，即得到30%的AB(29:1)溶液。此溶液zuì好在一個月內(nèi)用完，必須4℃避光保存。
C：配SSCP PAGE膠：在一個250mL的三角瓶中，先按下表的用量加入去離子水、30% AB溶液溶液和10×TBE緩沖液。丙烯酰胺單體溶液具有神經(jīng)毒性，一定要戴手套操作。

PAGE膠濃度	各成分用量(單位：ml)			總體積(ml)
	去離子水	30%AB溶液	10×TBE緩沖液
5%	73.4	16.6	10.0	100
6%	70.0	20.0	10.0	100
7%	66.7	23.3	10.0	100
8%	63.3	26.7	10.0	100
9%	60.0	30.0	10.0	100
10%	56.7	33.3	10.0	100
11%	53.3	36.7	10.0	100
12%	50.0	40.0	10.0	100

注：有大量文獻報道PAGE膠中加入5%-10%的甘油能提高某些位點的分辨率。如果選擇加入10%的甘油，則減少去離子水的用量10mL，同時加入10mL甘油。
D：搖晃混勻。zuì好能抽真空10-15分鐘以去除溶液中的氧氣(氧氣能抑制丙烯酰胺聚合反應(yīng))，無條件也可以不脫氧。
E：加入500μL 10%APS和100μL TEMED，迅速搖勻后倒膠。
F:在膠的液面距離達到頂部時停止灌膠，插入梳子。
G:室溫聚合30-60分鐘(低溫抑制聚合反應(yīng))。
H: 拔出梳子，用1×TEB液沖洗加樣孔。
I: 放4℃冰箱預(yù)冷30分鐘-12小時。為了防止膠收縮，zuì好頂部加少量1×TBE緩沖液。預(yù)冷的膠有利于保持單鏈DNA的構(gòu)型。
2. 將預(yù)冷的凝膠板固定在電泳裝置上，往上槽和下槽中加入足夠1×TEB電泳液。
3. 取3-5μl SSCP-PCR樣品，加入等體積2×非變性PAGE上樣液，85℃處理5分鐘后冰浴。用前短暫離心后取2μl上樣。
4.連接電源線，打開電源開關(guān)。如果PAGE中不含甘油，則使用25W的功率，電泳5-7小時(對3—40cm長的PAGE膠而言)。如果使用含甘油的PAGE，則使用8W的功率，電泳16-18小時。由于溫度變化過大會改變DNA構(gòu)型，所以電泳時zuì好能保持恒溫。對不含甘油的PAGE，zuì好恒溫在4℃、對含甘油的PAGE，zuì好恒溫在25℃。
5. 終止電泳，取出凝膠進行后續(xù)的處理(如銀染)。

疑難解答：
一、為何SSCP-PCR帶型有復(fù)合條帶？
原因之一：可能是殘留的PCR引物跟單鏈的DNA結(jié)合形成遷移率不同的條帶。解決方法是稀釋PCR或電泳前將PCR產(chǎn)物進行純化。
原因之二：可能是PCR產(chǎn)物用量過高，彼此復(fù)性。解決辦法是將PCR產(chǎn)物稀釋后4-8倍后使用。
二、如何提高電泳分辨率？
可以在配膠時加入甘油(終濃度為5%-10%)，因為甘油是弱變性劑，能部分展開DNA折疊結(jié)構(gòu)，增加表面積，增加電泳時位移差異。但加入甘油后粘性變大，電泳速度變慢，因此只適合室溫電泳使用，不要4℃電泳。如果條件允許，zuì好同時做加甘油和不加甘油的電泳實驗。

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