甲酰胺加樣緩沖液(2×)是高品質(zhì)的核酸電泳和回收產(chǎn)品，由北京百奧萊博供應(yīng)，本產(chǎn)品用于科研目的，我公司的甲酰胺加樣緩沖液(2×)品質(zhì)上佳，經(jīng)過多年的開發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...

特別提示：包括甲酰胺加樣緩沖液(2×)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：甲酰胺加樣緩沖液(2×)
產(chǎn)品貨號：GL1174
產(chǎn)品規(guī)格：5ml

用途：
加樣緩沖液

注意事項：
主要由去離子甲酰胺、EDTA、溴酚藍、二甲苯青FF等組成。

儲存條件：4℃，避光，12個月

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BTN130835 低熔點瓊脂糖 5g
WE0216 50×TAE 500ml

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名稱：一站式RNA電泳套裝
貨號：BTN60904
規(guī)格：10次
本品是包括瓊脂糖、去離子甲醛、RNA上樣液、電泳液等在內(nèi)的RNA電泳套裝，專門用于RNA電泳分析?？梢赃M行至少10次mini變性膠電泳。

產(chǎn)品特點：
1. 即開即用，用戶不需要自己進行RNase 滅活、高壓滅菌、pH調(diào)節(jié)等操作。
2.與Northern雜交等后續(xù)反應(yīng)兼容。

產(chǎn)品組成：

成分	規(guī)格
瓊脂糖	5g
超純水	250ml
甲醛	60ml
RNAload(含EB)	0.5ml
RNAep，10×	100ml
說明書	1份

儲存條件：常溫運輸和保存，但收到貨后RNAload 需要4℃保存，RNAep，10×一旦打開需要-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
注意：所有器皿(三角瓶，電泳槽，槍頭等)均需去除RNase。強烈推薦使用本公司的的固相RNase 清除劑。

一、配制瓊脂糖甲醛變性膠(1.2%，100mL)
1.在三角瓶中加入下列成份：瓊脂糖 1.2-1.5g；DEPC水 87mL
2. 將瓊脂糖加熱融化后，加入10mL 10×RNAep(10×RNAep 就是10×MOPS緩沖液，其瓶子一旦打開，就很容易產(chǎn)生污染細菌，細菌大量繁殖后會釋放大量 RNase，所以剩下的10×RNAep zuì好-20℃放置)。
3. 待膠冷卻至 60℃左右，再加下列成份：甲醛 3.0mL；自備EB(10mg/mL)2-4μL
注意：由于本試劑盒提供的RNAload中含EB，所以也可以不加EB，但效果較差。如果使用自備的其他染料，如SYBR Green I，則不能同時使用其他染料，包括含EB的RNAload，用戶需要另購不含EB的RNAload)。
4. 混勻后倒膠，凝固半小時后即可以使用。

二、配制電泳液
5. 將RNAep 用DEPC 水稀釋十倍后即成電泳液，所需要的體積根據(jù)使用的電泳槽決定。

三、變性RNA樣品
6.在一干凈的離心管中將5-10μL RNA和15μL RNAload 混合，50-60℃保溫10分鐘后冰浴5-10分鐘，直接上樣。注意：每一泳道至多可分析30μg RNA，通常用10-20μg 總RNA進行Northern雜交，可以檢測高豐度mRNA(占mRNA 總量的0.1%以上)；如待測RNA含量微，每個泳道需加0.5-3.0μg poly(A)+ RNA。

四、電泳
7.電泳時，將凝膠預(yù)電泳5 min(電壓為5 V/cm)。隨后加樣品和分子量對照(如果有的話)，以3－4 V/cm的電壓電泳，直至染料遷移至膠下游的3/4處。
8.電泳結(jié)束后，在300nm 紫外燈下拍照。

五、后續(xù)處理
9. 按標(biāo)準(zhǔn)方法進行Northern雜交等后續(xù)處理。

使用效果：

圖注: 用本產(chǎn)品電泳兔全血總RNA效果圖。10μL 總RNA與15μL RNAload 混合后在甲醛瓊脂糖變性膠上電泳0.5小時，直接在紫外燈下觀察并照相。

疑難解答：
Q：RNA電泳為何zuì好使用RNAep，不要使用DNA電泳液TAE或TBE？
A：一是因為RNAep 經(jīng)過去RNase處理，而一般實驗室使用的TAE或TBE都沒有經(jīng)過去RNase處理，故有可能含RNase，使樣品RNA 降解。即使要滅活TAE或TBE中的RNase 也十分麻煩，因為DEPC 不能處理含Tirs的緩沖液；二是TEB含有硼酸，硼酸是研究多羥基醇和糖的經(jīng)典試劑，它能與RNA中含多羥基的核糖反應(yīng)生成糖硼酸絡(luò)合物，故電泳時RNA 帶型十分彌散。在一定濃度范圍內(nèi)，RNA分子間還能通過硼酸形成分子間復(fù)合物，出現(xiàn)電泳時各種RNA以一條帶的形式出現(xiàn)的現(xiàn)象。所以RNA電泳時要避免使用含硼酸的緩沖液。使用TAE效果雖然比TBE 稍好，但文獻報道(BioTechniques 2000，28:414-415)，它不能分離某些大小不同的RNA分子。
Q：上樣孔里的紅色熒光物一定是污染的基因組DNA 嗎？
A：不是。用TAE或TBE電泳液和非變性膠電泳RNA時容易產(chǎn)生此現(xiàn)象，初步研究發(fā)現(xiàn)大部分紅色熒光物是變性不充分的單鏈RNA通過堿基互補或通過硼酸絡(luò)合(如果使用TBE作電泳液的話)形成的復(fù)合物，加RNase處理后，這些紅色熒光物一般會消失。為避免此現(xiàn)象，建議zuì好使用甲醛變性膠電泳。如果需要使用非變性膠，也必須在上樣前使RNA變性。
使用百奧萊博優(yōu)化的上樣/變性/染色三用溶液RNAload可以使RNA在非變性膠上電泳時也有較好分辨率。使用非變性膠時，可以使用TAE或超快電泳液SuperBuffer-2，zuì好不要使用TBE緩沖液，因為TBE中的硼酸能與RNA的多羥基形成復(fù)合物，RNA 很難形成銳利的條帶。
Q：如何確認和去處除污染的基因組DNA？
A：如果懷疑有DNA污染，可以用RNase處理RNA樣品，然后再電泳。如果上樣孔里的紅色熒光物不消失，則表示是基因組DNA污染。進一步確認可以使用PCR擴增法。去除污染的DNA可以使用非酶的DNA去除劑DNAScavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有殘留的RNase污染，所以必須嚴格按照廠家提供的使用手冊進行操作。
Q：為何我的植物RNA樣品有4-5 條帶？
A：部分植物組織有葉綠體等質(zhì)體，而葉綠體有核糖體，所以也有其rRNA。
葉綠體的rRNA跟細胞漿里面核糖體的rRNA大小不同，所以一般會多出兩條帶(共4 條rRNA 條帶)。小的tRNA和5S rRNA 有時可見，有時不可見，取決于回收效率。

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