Cy5.5標(biāo)記蛋白A由專(zhuān)業(yè)試劑供應(yīng)商北京百奧萊博提供，用于科學(xué)研究，我公司專(zhuān)注于抗體制備及分型產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和供應(yīng)，為您提供的Cy5.5標(biāo)記蛋白A質(zhì)量可靠，批間差小，且價(jià)格公道，熱切盼望您選購(gòu)我們的產(chǎn)品。...

特別提示：包括Cy5.5標(biāo)記蛋白A在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱(chēng)：Cy5.5標(biāo)記蛋白A
英文名稱(chēng)：Protein A-Cy5.5 Conjugate
產(chǎn)品貨號(hào)：GH0885
產(chǎn)品規(guī)格：100μg/200μg

本制品以HPLC分離純化的高純度原核表達(dá)蛋白A(Protein A)為原料，采用進(jìn)口花青染料5.5(Cyanine 5.5，Cy5.5)標(biāo)記制備，溶于PBS(pH7.4)中，蛋白濃度約1mg/ml，含有NaN3等穩(wěn)定劑，可用于抗體的各種免疫檢測(cè)分析。經(jīng)稀釋后可用于免疫熒光和流式細(xì)胞分析，效價(jià)1:50～800。zuì佳工作濃度zuì終用戶需自行優(yōu)化。

蛋白A(Protein A，Staphylococcal Protein A，SPA)也稱(chēng)A蛋白，是A型金黃色葡萄球菌(Staphylococcus Aureus)的細(xì)胞壁蛋白，可由多種金黃色葡萄球菌菌株產(chǎn)生的一種高度穩(wěn)定的細(xì)胞表面受體，可從分泌蛋白A的金黃色葡萄球菌菌株的培養(yǎng)基中分離純化而得。蛋白A是分子量約42,000的多肽鏈組成，包含四個(gè)富含天冬氨酸和谷氨酸但無(wú)半胱氨酸的重復(fù)結(jié)構(gòu)域，幾乎不含糖，并且僅含有4個(gè)酪氨酸殘基，不含色氨酸。蛋白A能夠結(jié)合到許多物種免疫球蛋白(特別是IgG)的Fc結(jié)構(gòu)域。已證實(shí)，一個(gè)蛋白A分子能同時(shí)結(jié)合至少2個(gè)IgG分子。蛋白A的Fc結(jié)合域由三個(gè)反向平行的 α-螺旋組成，當(dāng)其與免疫球蛋白的Fc結(jié)構(gòu)域結(jié)合時(shí)，第三個(gè)α-螺旋被破壞。蛋白A可與人類(lèi)IgG亞型、IgM、IgA和IgE，以及小鼠IgG1(弱)、IgG2a和IgG2b的Fc部分結(jié)合。也可與其他物種(包括猴、兔、豬、豚鼠、狗和貓)的IgG結(jié)合，常用于免疫球蛋白的分析和IgG的分離純化。蛋白A還可參與許多不同的生物學(xué)保護(hù)功能，包括抗腫瘤、抗毒素和抗癌活性。除了作為免疫調(diào)節(jié)劑外，它還具有抗真菌和抗寄生蟲(chóng)活性。

蛋白A可與各種受體分子包括熒光染料(Cy5.5，PE)、酶標(biāo)記物(過(guò)氧化物酶、β-半乳糖苷酶、堿性磷酸酶)、生物素和膠體金交聯(lián)形成偶聯(lián)物，而不影響分子上的抗體結(jié)合位點(diǎn)。這些偶聯(lián)物可在各種免疫化學(xué)分析包括蛋白質(zhì)印跡、免疫組織化學(xué)和ELISA 應(yīng)用中用于檢測(cè)免疫球蛋白。此外，也可將蛋白A固定到瓊脂糖或聚丙烯酸樹(shù)脂微球等固相載體上，用以純化多克隆和單克隆抗體以及免測(cè)沉淀等試驗(yàn)。

保存條件：在-20℃或以下保存。請(qǐng)勿反復(fù)凍融或于0℃以上久置。

根據(jù)您的關(guān)注的Cy5.5標(biāo)記蛋白A，Cy5.5標(biāo)記蛋白A，GH0885，百奧萊博，，，您可能還對(duì)以下產(chǎn)品有需求：



名稱(chēng)：小鼠IgM類(lèi)單抗腹水純化試劑盒
貨號(hào)：F080202
規(guī)格：可純化50ML腹水量

名稱(chēng)：小鼠IgG1/IgG2類(lèi)單抗腹水純化試劑盒
貨號(hào)：F080203
規(guī)格：可純化50ML腹水量

名稱(chēng)：小鼠IgG3類(lèi)單抗腹水純化試劑盒
貨號(hào)：F080204
規(guī)格：可純化50ML腹水量

名稱(chēng)：蛋白A磁珠抗體純化試劑盒
貨號(hào)：CZ010
規(guī)格：1ml/5ml/25ml
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
Protein A(or A/G)抗體純化磁珠系列產(chǎn)品是利用蛋白偶聯(lián)技術(shù)使Protein A(or A/G)共價(jià)包被到NHS活化的超順磁性微球表面。與當(dāng)前免疫磁珠市場(chǎng)上同類(lèi)產(chǎn)品相比，該產(chǎn)品具有更高的抗體結(jié)合能力和較低的蛋白非特異吸附率，洗脫條件更均一，一步純化即可從血清樣品中分離出純度大于90%的抗體。本產(chǎn)品為納米級(jí)磁性微球，具有比表面積，可大幅度縮短抗體吸附所需的時(shí)間，熟練操作可在15 min內(nèi)完成抗體吸附過(guò)程，30 min內(nèi)完成抗體純化流程。抗體純化磁珠試劑盒配有經(jīng)過(guò)優(yōu)化的預(yù)制緩沖液，為抗體純化實(shí)驗(yàn)提供了zuì佳的反應(yīng)條件，增強(qiáng)了抗體純化實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性。
本產(chǎn)品可重復(fù)使用，適用于血漿、腹水、組織培養(yǎng)上清液等樣品中的抗體純化，也可用于抗體固定及其它相關(guān)研究。用戶可根據(jù)目標(biāo)抗體的種屬來(lái)源及亞型選擇磁珠的類(lèi)別，Protein A，Protein A/G磁珠與不同抗體的親和性比較參見(jiàn)附表1。
儲(chǔ)存條件 2～8℃保存
保質(zhì)期 1年
注：磁珠結(jié)合Human IgG能力(Antibody Capacity)分別為：Protein A：1.4～1.6 mg/mL; Protein A/G：
1.8～2.0 mg/mL
操作流程：
不同種類(lèi)的免疫磁珠具有不同的抗體結(jié)合能力，在執(zhí)行抗體純化操作之前，操作者應(yīng)先估算待純化樣品中的抗體含量(一般血清樣品中抗體含量約2～8 mg/mL，細(xì)胞培養(yǎng)物中抗體濃度因表達(dá)量不同而變化較大)；然后根據(jù)所選免疫磁珠的抗體結(jié)合能力(見(jiàn)免疫磁珠相關(guān)產(chǎn)品列表或者產(chǎn)品組成的Antibody Capacity數(shù)據(jù))，計(jì)算免疫磁珠的大概用量，免疫磁珠用量過(guò)多或過(guò)少均影響抗體純化的效果，建議免疫磁珠用量的zuì大載量應(yīng)為樣品抗體含量的80%～。
以下操作步驟按照純化抗體，取用100 μL Protein A抗體純化磁珠為例進(jìn)行詳細(xì)描述。操作者可以參照以下步驟中各種緩沖液的用量及容器大小，按比例調(diào)整實(shí)際操作中各成分的用量。
樣品處理：取抗體含量約為0.1～0.15 mg的樣品置于新的1.5 mL EP管中，加入抗體結(jié)合緩沖液至總體積為500 μL(如樣品體積大于500 μL則無(wú)需加入)，混合均勻。
2. 磁珠預(yù)處理：將抗體純化磁珠漩渦振蕩30 s，使磁珠充分重懸；取100μL磁珠懸液置于另一新的1.5 mL EP管中。對(duì)磁珠懸液進(jìn)行磁性分離(將EP管放置于磁性分離器)上，使磁珠吸附在管壁至溶液澄清；該操作描述以下省略，棄上清液。從磁性分離器上取下EP管。用抗體結(jié)合緩沖液洗滌2次，棄上清液，管中磁珠可直接用于抗體分離)。
3. 抗體吸附：在步驟2預(yù)處理的磁珠管中加入步驟1處理的樣品溶液，漩渦振蕩均勻，在室溫下(約25℃)置于翻轉(zhuǎn)混合儀或者手工輕輕翻轉(zhuǎn)EP管，促使樣品和磁珠充分接觸并吸附，翻轉(zhuǎn)約15 min后進(jìn)行磁性分離，移棄上清液。
4. 磁珠洗滌：向EP管中加入1 mL抗體結(jié)合緩沖液，振蕩重懸磁珠后進(jìn)行磁性分離，移棄上清液；該操作重復(fù)3次。
5. 抗體洗脫(方式1-高鹽弱酸性洗脫)：
1) 抗體洗脫：在步驟4完成磁珠洗滌的EP管中加入0.5～1.0 mL抗體洗脫緩沖液，用移液器吹打或者渦旋震蕩下迅速重懸，然后在室溫下(約25℃)置于翻轉(zhuǎn)混合儀或者手工輕輕翻轉(zhuǎn)EP管，翻轉(zhuǎn)10 min后進(jìn)行磁性分離，收集上清液至新的EP管；
2) 抗體透析：因抗體洗脫緩沖液含有較高濃度的鹽分，收集的抗體溶液不能直接用于SDS-PAGE檢測(cè)，但可以用抗體洗脫緩沖液調(diào)零進(jìn)行抗體濃度測(cè)定。抗體洗脫緩沖液呈偏酸性(pH4.5)，建議操作者用自行配制的中性低鹽溶液(即透析液)立即對(duì)收集的抗體溶液進(jìn)行透析處理，以降低抗體失活率，獲得較高活性和穩(wěn)定性的抗體溶液。
6. 抗體洗脫(方式2-低pH洗脫)：
1) 抗體洗脫：在步驟4完成磁珠洗滌的EP管中加入0.5～1.0 mL抗體洗脫緩沖液，用移液器吹打或者渦旋震蕩下迅速重懸，然后在室溫下(約25℃)置于翻轉(zhuǎn)混合儀或者手工輕輕翻轉(zhuǎn)EP管，翻轉(zhuǎn)10 min后進(jìn)行磁性分離，收集上清液至新的EP管；
2) 抗體中和：因抗體洗脫緩沖液pH值較低，收集的抗體溶液需要立即加入一定量的抗體中和緩沖液，一般為收集抗體溶液體積的1/20～1/10，zuì終使洗脫的抗體溶液pH值保持中性環(huán)境，以降低抗體失活率，獲得較高活性和穩(wěn)定性的抗體溶液。收集的抗體可直接用于SDS-PAGE檢測(cè)及抗體濃度的測(cè)定。
7. 磁珠后處理：使用后的磁珠用磁珠洗滌緩沖液進(jìn)行重懸，然后執(zhí)行磁性分離，棄上清液，重復(fù)操作一次；加入100 μL磁珠儲(chǔ)存緩沖液，置于2～8℃保存。
磁珠再生：
1. 磁珠多次使用后會(huì)有沉淀蛋白、強(qiáng)疏水性蛋白、脂蛋白等雜質(zhì)非特異性吸附到磁珠上，為了保證磁珠的使用效率，建議持續(xù)使用5次后進(jìn)行磁珠再生處理。
2. 按約1 mL磁珠5 mL的比例加入磁珠再生緩沖液，振蕩均勻，在室溫下置于翻轉(zhuǎn)混合儀或者手工輕輕翻轉(zhuǎn)混合，10 min后進(jìn)行磁性分離，棄上清液。
3. 按約1 mL磁珠5 mL的比例加入磁珠洗滌緩沖液進(jìn)行重懸，然后執(zhí)行磁性分離，棄上清液，重復(fù) 以上操作兩次。
4. 按照約1 mL磁珠1 mL的比例加入適量磁珠儲(chǔ)存緩沖液，置于2～8℃保存。
注意事項(xiàng)：
1. 進(jìn)行抗體純化操作之前，請(qǐng)務(wù)必認(rèn)真閱讀本操作說(shuō)明書(shū)。
2. 本產(chǎn)品須與磁性分離器配套使用。
3. 磁珠使用前應(yīng)充分振蕩均勻。
4. 磁珠應(yīng)保存在儲(chǔ)存溶液中，防止干燥。
5. 請(qǐng)勿將磁珠冷凍或離心，以免引起不可逆聚集。
6. 本產(chǎn)品僅供研究使用。
常見(jiàn)問(wèn)題及解答(FAQ)：
Q1：如何提高抗體與磁珠結(jié)合效率?
A1：磁珠與抗體的結(jié)合效率與抗體的種屬來(lái)源及所屬亞型有關(guān)，請(qǐng)確認(rèn)抗體的類(lèi)型與Protein A配基的親和效率(附表1)，如抗體所屬亞型與Protein A的親和度較低，可以通過(guò)增加抗體與磁珠的孵育時(shí)間(30～120 min)、提高結(jié)合緩沖液的pH值(8～9)及降低離子強(qiáng)度(25～100 mM NaCl)等方法提高親和效率，或選擇與目標(biāo)抗體具有更高親和度的配基(如Protein A/G)。
Q2：如何提高抗體洗脫效率？
A2：抗體與Protein A配基親和度太高導(dǎo)致抗體洗脫效率低，可以通過(guò)降低洗脫緩沖液的pH值(1.9～2.5)、增大洗脫緩沖液的離子強(qiáng)度(可選用2～3 M MgCl2)或延長(zhǎng)洗脫時(shí)間，提高抗體的洗脫效率。但應(yīng)注意抗體在低pH條件下容易形成聚集物，抗體洗脫產(chǎn)物應(yīng)馬上用堿性緩沖劑(如Tris、HEPES等)調(diào)節(jié)pH至中性。
Q3：如何避免磁珠在儲(chǔ)存或使用過(guò)程中可能出現(xiàn)的聚集情況？
A3：磁珠應(yīng)保存在2～8℃，使用時(shí)應(yīng)避免由于污染而導(dǎo)致的不可逆聚集，或因干燥而導(dǎo)致的聚集。磁珠在低pH的洗脫緩沖液中發(fā)生聚集屬于正常現(xiàn)象，不影響磁珠的正常使用。在Binding Buffer和Elution Buffer中添加終濃度為0.1%(v/v)的非離子型去垢劑(如NP-40、Tween-20或Triton X-100)可有效防止磁珠聚集。經(jīng)過(guò)低pH洗脫操作的磁珠可以用結(jié)合緩沖液洗滌至中性，然后用含有0.1%(v/v)Tween-20的Tris Buffer(pH7.5)振蕩重懸磁珠，并用超聲波水浴處理2 min，即可使磁珠恢復(fù)均勻狀態(tài)，以上處理均不影響磁珠的抗體結(jié)合效率。
Q4：如何解決磁珠易粘附管壁的現(xiàn)象？
A4：建議使用低吸附率的耗材進(jìn)行磁珠操作。另外，在緩沖液中添加0.01%～0.1%(v/v)的非離子型去垢劑(如NP-40、Tween-20或Triton X-100)可以有效降低磁珠對(duì)耗材的粘附。
Q5: 磁珠在使用過(guò)程中出現(xiàn)結(jié)塊現(xiàn)象？
A5：磁珠在使用時(shí)如果出現(xiàn)結(jié)塊現(xiàn)象一般較難振蕩打散，容易導(dǎo)致分布不均，出現(xiàn)該問(wèn)題的原因是磁珠在磁場(chǎng)中放置太久而使磁珠牢固的結(jié)合在一起。用超聲波水浴處理2 min即可打散磁珠使其重新分散，但應(yīng)注意超聲處理也會(huì)使磁珠在樣品溶液中捕獲的抗體脫落，所以磁珠在加樣后洗脫前不宜使用該方法。

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貨號(hào)	名稱(chēng)	規(guī)格
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F080204	小鼠IgG3類(lèi)單抗腹水純化試劑盒	可純化50ML腹水量
CZ011	蛋白A/G磁珠抗體純化試劑盒	1ml/5ml/25ml
CZ012	Protein A磁珠抗體純化試劑盒	5ml/100ml/500ml
CZ013	Protein G磁珠抗體純化試劑盒	5ml/100ml/500ml
GH0857	FITC標(biāo)記重組蛋白G二抗	200μg/300μg

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