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特別提示：包括高致病性禽流感H5N1病毒雙重熒光PCR檢測試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：高致病性禽流感H5N1病毒雙重熒光PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號：SYA153
產(chǎn)品規(guī)格：48次/盒



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規(guī)格：48次/盒
人類細小病毒B19是英國科學家Cossart及其同事于1977年在篩查無癥狀乙肝患者血清時無意發(fā)現(xiàn)的，根據(jù)生化及分子生物學特點將其歸為細小病毒科。由于其是在B組的第19號樣品中發(fā)現(xiàn)的，故命名為B19病毒。zuì初人們認為B19是人群中普遍存在而不致病的一種病毒，但后來發(fā)現(xiàn)，B19感染是引起傳染性紅斑、慢性溶血性貧血患者發(fā)生再障危象、免疫抑制患者慢性貧血、孕期流產(chǎn)、死胎的病原體。
本試劑盒適用于檢測人全血等標本中的人細小病毒(B19)DNA，適用于人細小病毒(B19)感染的輔助診斷，其檢測結果僅供參考。
【檢驗原理】
本試劑盒用一對人細小病毒B19特異性引物，結合一條特異性探針，用熒光PCR技術對人細小病毒B19核酸進行體外擴增檢測，用于對可疑感染者的病原學診斷。
【試劑組成】
名稱 數(shù)量 規(guī)格
核酸提取液 2管 1.5ml
酶液 1管 50μl
B19反應液 1管 1.0ml
B19陽性質(zhì)控品 1管 50μl
陰性質(zhì)控品 1管 250μl
說明：不同批號的試劑盒組分不可交互使用。
【儲存條件及有效期】
-20℃避光保存、運輸、避免反復凍融，有效期12個月。
【適用儀器】
ABI系列、MJ系列、Roche系列、博日系列及其他熒光定量PCR檢測儀。
【標本采集】
1. 適用標本類型：人全血；
2. 標本采集：
血液:無菌注射器抽取外周血1-2ml注入EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管；
【保存和運輸】
上述標本短期內(nèi)可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過6個月，標本運送應采用0℃冰壺。
【使用方法】
1. 樣品處理(樣本處理區(qū))
1.1 樣本前處理
取抗凝血下層(細胞層)50μl，加入200μl ddH2O使其脹破。
1.2 DNA提取
1) 取上述處理好的標本40μl，加入等體積核酸提取液，100℃恒溫處理10分鐘，13000 rpm離心5分鐘，取上清液轉(zhuǎn)移至新的1.5ml EP管，-20℃保存；
2) DNA的提取也可以采用北京百奧萊博科技有限公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒(離心柱提取法)，請嚴格按照試劑盒說明書進行操作。
2. 試劑配制(試劑準備區(qū))
根據(jù)待檢測樣本總數(shù)，設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1
管陰性對照+1管陽性對照)，每測試反應體系配制如下表：
試劑 B19 反應液 酶液
用量 20μl 1μl
3. 加樣(樣本處理區(qū))
將步驟1提取的DNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取4μl，加入相應的反應管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。
4. PCR擴增(核酸擴增區(qū))
4.1 將待檢測反應管置于熒光定量PCR儀反應槽內(nèi)；
4.2 推薦循環(huán)參數(shù)設置：
步驟 循環(huán)數(shù) 溫度 時間 收集熒光信號
1 1 cycle 94℃ 2min 否
2 40 cycle 94℃ 15sec 否
55℃ 30sec 是
反應體系為25ul；熒光通道檢測選擇：FAM通道。
5. 結果分析判定
5.1 結果分析條件設定
1) 設置基線(baseline)：一般情況下，對ABI 7500、7700等儀器設為6-15cycle，對PE5700設為3-15cycle,對MJ Research Option2設為6-12cycle。特殊情況可對基線適當調(diào)整。
2) 設置閾值(threshold):以閾值線剛超過陰性對照擴增曲線(無規(guī)則的噪音線)的zuì高點。
5.2 結果判斷
1) 陽性：檢測樣本Ct值小于等于35.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長期；
2) 可疑：檢測樣本Ct值大于35.0且小于40.0，重復一次實驗，如果Ct值仍小于40.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長期，為陽性，否則為陰性；
3) 陰性：檢測不到樣本Ct值或Ct值為40。
6. 對檢驗結果的解析
實驗室環(huán)境污染，試劑污染，標本交叉污染會出現(xiàn)假陽性結果；試劑運輸，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準確的結果。
7. 質(zhì)控標準
1) 陰性質(zhì)控品：擴增曲線無對數(shù)生長期或無Ct值顯示；
2) 陽性質(zhì)控品：擴增曲線有明顯對數(shù)生長期，且Ct值≤32;
以上條件應同時滿足，否則實驗視為無效。
【注意事項】
1. 所有操作嚴格按照說明書進行；
2. 試劑盒內(nèi)各種組分使用前應自然融化，混勻并短暫離心；
3. 反應液應避光保存；
4. 反應中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；
5. 使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服；
6. 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行，以免交叉污染；
7. 實驗完畢后用10%次氯酸或75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；
8. 試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全通則》進行處理。


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