柱式真菌RNA提取試劑盒由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持，本品用于科研試驗(yàn)，我公司專注于RNA提取純化產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和供應(yīng)，為您提供的柱式真菌RNA提取試劑盒質(zhì)量可靠，批間差小，且價(jià)格公道，熱切盼望您選購(gòu)我們的產(chǎn)品。...

特別提示：包括柱式真菌RNA提取試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：柱式真菌RNA提取試劑盒
英文名稱：Fungal RNA Column extraction kit
產(chǎn)品貨號(hào)：BTN80804
產(chǎn)品規(guī)格：50次

本試劑盒是在本公司真菌RNA提取試劑盒(BTN60305)基礎(chǔ)上改進(jìn)的柱式產(chǎn)品，跟真菌RNA提取試劑盒相比，它具有下列特點(diǎn)：
1. 柱式操作，更加簡(jiǎn)單快捷，整個(gè)過(guò)程只需要約30分鐘。
2. RNA 純度高，OD260/280一般都在2.0左右，可直接用于RT-PCR、Norther雜交、microarray hybridization、cDNA 合成等。
3. RNA產(chǎn)量高，一般在 20-70μg/mL 酵母培養(yǎng)物(約2.0 ×107個(gè)細(xì)胞)。
4. 非酶細(xì)胞破裂法，適用于各種形態(tài)和各個(gè)種屬的真菌及革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌，包括 Candida albican、Saccharomyces cerevisiae、Schizosaccharomyces pombe 、 Pichia pastoris 、Bacillus subtilis、Staphylococcusaureus等。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
溶液A	20ml
溶液B	25ml
溶液C	75ml
溶液D	25ml
離心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脫液	10ml
說(shuō)明書	1份

儲(chǔ)存條件：常溫運(yùn)輸，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 將50mg左右的干菌絲(或100mg左右的鮮菌絲、或適當(dāng)數(shù)量的真菌菌落)轉(zhuǎn)移到 1.5mL塑料離心管中。如果是液體真菌培養(yǎng)物，則直接將1-10mL液體真菌在 1.5mL塑料離心管中 12000～15000g離心 1分鐘，并棄盡液體培養(yǎng)基(可以分多次離心)。
2. 加入0.4mL溶液A 并充分吹打混勻。如果 A溶液存放時(shí)產(chǎn)生沉淀，請(qǐng)置于65℃融化，用前充分搖晃均勻。
3. 加入0.4mL溶液B，劇烈振蕩 30秒。
4. 65℃保溫 5分鐘。
5.室溫 12000～15000g離心 3～5分鐘，轉(zhuǎn)移上清到一干凈的1.5mL塑料離心管中。
6. 再加入0.1mL溶液B和0.1mL自備氯f(wàn)ǎng，振蕩混勻 30秒。
7.室溫 12000～15000g離心 3～5分鐘，轉(zhuǎn)移上清到一自備的、干凈的5mL塑料離心管中。
8. 加入相當(dāng)于上清 3倍體積的溶液C(約1.2-1.5mL)和1倍體積的溶液D(約0.4-0.5mL)，充分混勻。
9. 將混合液(約2.5mL)分 3-4次轉(zhuǎn) 移 到離 心 吸 附 柱中 。 每次13000-15000g室溫離心半分鐘，棄收集管中的穿透液。
10. 用 0.5mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，室溫離心半分鐘，棄收集管中的穿透液。
11.一次洗滌一般足夠去除雜質(zhì)。但如果樣品 OD260/280 比值不高，可以再用 0.5mL 通用洗柱液重復(fù)此步一次。
12.室溫離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的洗柱液會(huì)影響 RNA的使用。
13. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到一自備的RNase-free 1.5mL塑料離心管中，加入30-100μL RNA 洗脫液。
14.室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為RNA樣品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
15. RNA 完整性的電泳檢測(cè)：
 如果需要做 Northern雜交，強(qiáng)烈建議用戶使用甲醛變性膠進(jìn)行 RNA電泳，因?yàn)榉亲冃阅z不能分離所有的RNA分子(BioTechniques，28：414 ，2000)。 如 果是簡(jiǎn) 單 檢 測(cè) ，可以使 用 TAE或SuperBuffer-2 DNA/RNA 兩用快速電泳液，但文獻(xiàn)報(bào)道必須使用變性上樣液(BioTechniques，9:558，1990)。普通 DNA上樣液不含變性劑，也沒經(jīng)過(guò)去 RNase處理，所以zuì好不要使用。 尤其需要注意的是不要使用 TBE進(jìn)行 RNA電泳，因?yàn)門BE 所含硼酸是研究多糖的經(jīng)典方法----硼酸絡(luò)合法中的關(guān)鍵成分，硼酸通過(guò)與RNA 核糖中的羥基發(fā)生絡(luò)合反應(yīng)，形成 RNA分子內(nèi)或RNA分子間的絡(luò)合復(fù) 合物，使同樣長(zhǎng)度的RNA 具有不同的泳動(dòng)速度，電泳條帶彌散，同時(shí)有大的RNA 絡(luò)合復(fù)合物遲留在加樣孔中(一般會(huì)誤以為是基因組 DNA污染)。RNA分子內(nèi)或RNA分子間的絡(luò)合物的形成的多少和比例又與硼酸與RNA的數(shù)量比例有關(guān)，而 RNA樣品中污染的其他多糖也會(huì)參與此反 應(yīng)，使硼酸對(duì) RNA電泳的影響更復(fù)雜，所以TBE 對(duì) RNA電泳的影響 沒有規(guī)律性和重復(fù)性。有的樣品可以使用有的又不行，zuì好是避免使用。
16. RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測(cè)定：
 將5-10μL RNA 溶于TE緩沖液中(pH7.5-8.2之間)檢測(cè)其在 OD260的光吸收。通過(guò)光吸收可以得出 RNA濃度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，進(jìn)而計(jì)算出 RNA的產(chǎn)量(濃度 X 體積)和產(chǎn)率(RNA產(chǎn)量/細(xì)菌用量)。注意不要將RNA 稀釋在 DEPC 水中檢測(cè) OD260和OD280，否則光吸收比在 TE中測(cè)得的低 10%-15%。
17. RNA 純度測(cè)定：
 無(wú)污染的總RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，OD260/OD230一般在2.0-2.3 之間，如果低于或高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)或多糖的污染，但一般不影響 RT-PCR等反應(yīng)。蛋白質(zhì)污染可以通過(guò)酚/氯f(wàn)ǎng抽提一次然后酒精沉淀去除，DNA和多糖污染可以分別用我公司的DNA Scavenger和PS Scavenger 去除。測(cè) OD時(shí) RNA 不能過(guò)度稀釋使 OD 讀數(shù)低于儀器的有效范圍。

疑難解答：
Q：為何從酵母中提取的總 RNA 有 3 條小帶？
A：它們分別是70bp左右的tRNA，120bp左右的5S RNA，160bp左右的5.8 S RNA。
Q：上樣孔里的紅色熒光物一定是污染的基因組 DNA嗎？
A：不是。用 TAE或TBE電泳液和非變性膠電泳 RNA時(shí)容易產(chǎn)生此現(xiàn)象，百奧萊博初步研究發(fā)現(xiàn)大部分紅色熒光物是變性不充分的單鏈RNA 通過(guò)堿基互補(bǔ)或通過(guò)硼酸絡(luò)合(如果使用 TBE作電泳液的話)形成的復(fù)合物加 RNase處理后，這些紅色熒光物一般會(huì)消失。為避免此現(xiàn)象，建議zuì好使用甲醛變性膠電泳。如果需要使用非變性膠，也必須在上樣前使 RNA變性。使用百奧萊博優(yōu)化的上樣/變性/染色三用溶液 RNAload可以使 RNA在非變性膠上電泳時(shí)也有較好分辨率。使用非變性膠時(shí)，可以使用 TAE或超快電泳液 SuperBuffer-2，zuì好不要使用 TBE緩沖液，因?yàn)門BE中的硼酸能與RNA的多羥基形成復(fù)合物，RNA 很難形成銳利的條帶。
Q：如何確認(rèn)和去處除污染的基因組 DNA？
A：如果懷疑有 DNA污染，可以用 RNase處理 RNA樣品，然后再電泳。如果上樣孔里的紅色熒光物不消失，則表示是基因組 DNA污染。進(jìn)一步確認(rèn)可以使用 PCR擴(kuò)增法。去除污染的DNA可以使用非酶的DNA 去除劑DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有殘留的RNase污染，所以必須嚴(yán)格按照廠家提供的使用手冊(cè)進(jìn)行操作。

根據(jù)您的關(guān)注的柱式真菌RNA提取試劑盒，柱式真菌RNA提取試劑盒，BTN80804，百奧萊博，，，您可能還對(duì)以下產(chǎn)品有需求：



名稱：植物RNA提取試劑盒2.0(無(wú)氯f(wàn)ǎng柱式提取)
貨號(hào)：BTN160907
規(guī)格：50次
本試劑盒是無(wú)酚無(wú)氯f(wàn)ǎng柱式植物RNA提取試劑盒(BTN160906)的升級(jí)產(chǎn)品。不僅不需要氯f(wàn)ǎng處理，還解決了提取的植物總RNA中出現(xiàn)基因組DNA污染這一難題，提取的RNA通過(guò)PCR驗(yàn)證不含基因組DNA污染。

試劑盒特點(diǎn)：
1. 免酚和氯f(wàn)ǎng處理，操作安全可靠。
2. 簡(jiǎn)單快速，處理一個(gè)樣品只需要約十分鐘。
3. RNA 純度更高，平均 OD260/280一般都在2.0左右，能夠有效去除大多數(shù)植物中的多糖污染。
4. 目前已測(cè)試過(guò)上百種植物。
5. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern雜交、cDNA 合成等實(shí)驗(yàn)。
6. 高于進(jìn)口的柱式植物RNA提取產(chǎn)品。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
溶液A	50ml
溶液B	50ml
離心吸附柱	50套
通用洗柱液	100ml
膜反應(yīng)液	2.5ml
RNase-free DNase(1U/μL)	0.5ml
RNA洗脫液	10ml

儲(chǔ)存條件：常溫運(yùn)輸，4℃保存，DNase低溫運(yùn)輸保存，有效期一年。

使用方法：
1. 估算組織細(xì)胞的用量。每次微量提取一般需要100-200mg植物葉片、或50-100mg植物種子、或200-500mg植物果實(shí)。
2. 先將新鮮植物組織剪切成小塊(保存在RNA保存液中的植物組織需用紙吸去RNA保存液體后再剪切成小塊)，放入10-15mL塑料離心管中，加入1mL溶液A，然后用勻漿器勻漿5-20秒。勻漿時(shí)會(huì)產(chǎn)生泡沫，但不影響提取效果。也可以使用液氮硯磨法破碎植物組織，硯磨完后加入1mL溶液A。
注意：溶液A在4℃放置后可能會(huì)產(chǎn)生沉淀，使用前必須放在65℃水浴使沉淀徹底溶解并充分搖勻后再取用。
3. 將勻漿物或硯磨物轉(zhuǎn)移至干凈的1.5mL塑料離心管中(可以不必轉(zhuǎn)移非液體的細(xì)胞碎片)。有的植物組織(比如果實(shí))含有大量水份，勻漿液會(huì)多于1mL，轉(zhuǎn)移時(shí)也只取1mL。
4.室溫12000～15000g離心3～5分鐘，管底沉淀為細(xì)胞破碎物。
5. 將上清液(約0.6mL)轉(zhuǎn)移到另一干凈的1.5mL塑料離心管中。
6. 加入等體積的溶液B，充分顛倒混勻。如果有沉淀產(chǎn)生(對(duì)某些植物，屬于正?，F(xiàn)象)，千萬(wàn)不要去掉沉淀，一定要把所有的混合物上柱。
7. 將一半的溶液(如果有沉淀，則先混勻)轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，13000-15000g室溫離心半分鐘，棄穿透液。
8. 將剩下的一半溶液(如果有沉淀，則先混勻)轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中，13000-15000g室溫離心半分鐘，棄穿透液。
9. 加0.7mL 通用洗柱液，室溫離心半分鐘，棄穿透液。再加0.3mL 通用洗柱液，室溫離心半分鐘，棄穿透液。一般樣品如此洗滌兩次即可，但如果在第7 步加入溶液B后有沉淀產(chǎn)生，則需要洗三次，每次加入的通用洗滌液的量分別為0.4、0.3和0.3mL。
10. 12000rpm室溫離心10秒以便去除殘留液體。此步很重要，否則殘留的通用洗柱液會(huì)抑制后續(xù)反應(yīng)中DNase的活性。
11. 將10μl(10 U)的RNase-free DNase 加入到50μl 37℃預(yù)熱的DNA膜反應(yīng)液中，吹打混勻配制成DNase工作液。
12. 將DNase工作液在37℃預(yù)熱1分鐘，然后全部加入到離心吸附柱中，室溫放置5分鐘。注意：5分鐘一般足夠降解大多數(shù)情況下的DNA污染。如果DNA 沒有徹底降解(可能由于樣品中殘留的雜質(zhì)抑制了DNase的活性)，此步的保溫時(shí)間可以適當(dāng)延長(zhǎng)到10分鐘或15分鐘。
13. 直接在離心吸附柱中加0.7mL 通用洗柱液，蓋上蓋后顛倒數(shù)次混勻。
14. 12000rpm室溫離心半分鐘，棄穿透液。
15. 再加0.3mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，12000rpm室溫離心半分鐘，棄穿透液。
16. 12000rpm室溫離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的乙醇(通用洗柱液中的成分)會(huì)影響RNA的使用。
17. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到RNase-free 收集管中，加入30-50μl RNA洗脫液，室溫放置1-2分鐘。
18. 13000-15000g室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為RNA樣品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
19. RNA 完整性的電泳檢測(cè)：如果需要做Northern雜交，強(qiáng)烈建議用戶使用甲醛變性膠進(jìn)行RNA電泳，因?yàn)榉亲冃阅z不能分離所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
20. RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測(cè)定：將5-10μl RNA 溶于TE緩沖液中(pH7.5-8.2 之間)檢測(cè)其在OD260的光吸收。通過(guò)光吸收可以得出RNA濃度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，進(jìn)而計(jì)算出RNA的產(chǎn)量(濃度X 體積)和產(chǎn)率(RNA產(chǎn)量/組織用量)。
21. RNA 純度測(cè)定：無(wú)污染的總RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染，但一般不影響RT-PCR等反應(yīng)。

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