細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持，本品用于科研試驗(yàn)，本品質(zhì)量穩(wěn)定，價(jià)位合理，需要細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒等DNA提取純化產(chǎn)品的客戶(hù)，請(qǐng)到我公司官網(wǎng)聯(lián)系我們。...

特別提示：包括細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱(chēng)：細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒
英文名稱(chēng)：Bacteria Genomic DNA Extraction Kit
產(chǎn)品貨號(hào)：WE0178
產(chǎn)品規(guī)格：50次

  本試劑盒適用于從革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽(yáng)性菌中提取高純度總DNA，也適用于真菌等樣本。本試劑盒每次可處理106-108個(gè)細(xì)胞，獲得多至20μg總DNA。純化過(guò)程中不需苯酚或氯f(wàn)ǎng等有毒溶劑，無(wú)需乙醇沉淀，一小時(shí)內(nèi)即可獲得高純度DNA。本試劑盒采用優(yōu)化的緩沖體系使裂解液中的DNA特異的結(jié)合到硅基質(zhì)離心吸附柱上，而其他污染物可流過(guò)膜，PCR和其他酶促反應(yīng)的抑制劑可通過(guò)兩步洗滌步驟被有效去除，zuì后使用低鹽緩沖液或水洗脫，即可獲得高純度DNA。純化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文庫(kù)構(gòu)建、Southern Blot、分子標(biāo)記等下游實(shí)驗(yàn)。

試劑盒組成：

組份	50次
Buffer GTL	15ml
Buffer GL	15ml
Buffer GW1(濃縮液)	13ml
Buffer GW2(濃縮液)	15ml
Buffer GE	15ml
蛋白酶K	25 mg
蛋白酶K 儲(chǔ)存液	1.25ml
吸附柱DM及收集管	50套

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1、適用于從革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽(yáng)性菌等樣品中分離純化基因組DNA。
2、無(wú)需使用有機(jī)溶劑，徹底去除污染物以及下游反應(yīng)抑制物，快速提取高品質(zhì)DNA。

自備試劑：無(wú)水乙醇；提取革蘭氏陽(yáng)性菌需自備Enzymatic Lysis Buffer。
Enzymatic Lysis Buffer配制方法：20 mM Tris，pH8.0；2 mM Na2-EDTA，pH8.0；1.2% Triton X-100。121℃滅菌處理20分鐘，加入適量的Lysozyme(溶菌酶)其終濃度為20mg/ml。詳細(xì)配制方法可登錄百奧萊博網(wǎng)站，搜索WE0178S產(chǎn)品查詢(xún)。

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備及重要注意事項(xiàng)：
1、向蛋白酶K 中加入1.25ml 蛋白酶K 儲(chǔ)存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿長(zhǎng)時(shí)間室溫放置，避免反復(fù)凍融，以免影響其活性。
2、樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致提取的DNA片段較小且提取量下降。
3、如果提取次生代謝產(chǎn)物大量積累或細(xì)胞壁厚的細(xì)菌培養(yǎng)物的基因組，建議在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期早期收集樣品。
4、次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說(shuō)明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入無(wú)水乙醇。
5、使用前請(qǐng)檢查Buffer GTL和Buffer GL是否出現(xiàn)結(jié)晶或者沉淀，如有結(jié)晶或者沉淀出現(xiàn)，請(qǐng)將Buffer GL和Buffer GTL于56℃水浴重新溶解。
6、如果下游實(shí)驗(yàn)對(duì)RNA污染比較敏感，可以在加入Buffer GL前加入4μl DNase-Free的RNase A(100 mg/ml)，RNase A本試劑盒并未提供，如需要可單獨(dú)向本公司訂購(gòu)，貨號(hào)：WE0225S。
7、如果提取樣品為革蘭氏陽(yáng)性菌，需客戶(hù)自行配制Enzymatic Lysis Buffer處理菌體，其中需使用濃度為20 mg/ml的Lysozyme(溶菌酶)，Lysozyme本試劑盒并未提供，如需要可單獨(dú)向本公司訂購(gòu)，貨號(hào)：WE0214S。

操作步驟：

一、革蘭氏陰性菌基因組DNA的提?。?/strong>
1、取細(xì)菌培養(yǎng)物1-5ml(106-108個(gè)細(xì)胞，zuì多不超過(guò)2×109個(gè)細(xì)胞)置于離心管(自備)中，12000rpm(~～13400×g)離心1分鐘，盡量吸凈上清。
2、向沉淀中加入180μl Buffer GTL，振蕩使菌體重懸。
3、加入20μl 蛋白酶K ，渦旋混勻，56℃孵育，直至溶液變清亮，孵育過(guò)程中每隔一段時(shí)間顛倒或震蕩離心管使樣本分散。
注意：如需去除RNA，可在上述步驟完成后，加入4μl濃度為100 mg/ml 的RNase A溶液(貨號(hào)：WE0225S)，震蕩混勻，室溫放置5-10分鐘。
4、加入200μl Buffer GL，渦旋震蕩充分混勻。加200μl無(wú)水乙醇，渦旋震蕩充分混勻。短暫離心，使管壁上的溶液收集到管底。
注意：
1)如果多個(gè)樣品一起操作，Buffer GL和無(wú)水乙醇可以等比例混勻后一起加入，震蕩混勻。
2)加入Buffer GL和無(wú)水乙醇后可能會(huì)產(chǎn)生白色沉淀，不會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
5、將步驟4所得溶液(包括形成的沉淀)全部加入到已裝入收集管的吸附柱中，若一次不能加完溶液，可分多次轉(zhuǎn)入。12000rpm離心1分鐘，棄廢液，將吸附柱放回收集管中。
6、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前檢查是否已加入無(wú)水乙醇)，12000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前檢查是否已加入無(wú)水乙醇)，12000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。
注意：如需進(jìn)一步提高DNA純度，可重復(fù)步驟7。
8、12000rpm離心2分鐘，倒掉收集管中的廢液。將吸附柱置于室溫?cái)?shù)分鐘，以徹底晾干。
注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除，乙醇?xì)埩魰?huì)影響后續(xù)酶促反應(yīng)(酶切、PCR等)。
9、將吸附柱置于一個(gè)新的離心管中，向吸附柱的中間部位懸空加入50-200μl Buffer GE，室溫放置2-5分鐘，12000rpm離心1分鐘，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
1)如果下游實(shí)驗(yàn)對(duì)pH值或EDTA敏感，可以用滅菌水洗脫。洗脫液的pH值對(duì)洗脫效率有很大影響，若用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH將水的pH值調(diào)到此范圍)，pH值低于7.0時(shí)洗脫效率不高。
2)離心之前室溫孵育5分鐘可以增加產(chǎn)量。
3)用另外的50-200μl Buffer GE或滅菌水再次洗脫可以增加產(chǎn)量。
4)如果要提高DNA的終濃度，可以將步驟9所得的DNA洗脫液重新加至吸附膜上，重復(fù)步驟9；若洗脫體積小于200μl，可以增加DNA的終濃度，但可能會(huì)減少總產(chǎn)量。如果DNA的量小于1μg，推薦用50μlBuffer GE或滅菌水洗脫。
5)保存在水中的DNA會(huì)受到酸性水解作用影響，如需長(zhǎng)期保存，推薦用Buffer GE洗脫并于-20℃保存。

二、革蘭氏陽(yáng)性菌基因組DNA的提?。?/strong>
1、取細(xì)菌培養(yǎng)物1-5ml(106-108個(gè)細(xì)胞，zuì多不超過(guò)2×109個(gè)細(xì)胞)置于離心管(自備)中，12000rpm(～13400×g)離心1分鐘，盡量吸凈上清。
2、加入180μl Enzymatic Lysis Buffer(自備)使菌體重懸。Enzymatic Lysis Buffer配制方法見(jiàn)說(shuō)明書(shū)前部分自備試劑。
3、37℃孵育30分鐘。
4、加入20μl 蛋白酶K 渦旋震蕩，充分混勻。加入200μl Buffer GL，渦旋震蕩混勻。
注意：不要把蛋白酶K 直接加到Buffer GL中。
5、56℃孵育30分鐘。
注意：
1)如果需要，95℃孵育15分鐘可以使病原體失活，但是95℃孵育會(huì)造成一些DNA的降解。
2)如需去除RNA，可在上述步驟完成后，加入4μl濃度為100 mg/ml的RNase A溶液(貨號(hào)：WE0225S)，震蕩混勻，室溫放置5-10分鐘。
6、加入200μl無(wú)水乙醇，渦旋震蕩充分混勻。
注意：加入無(wú)水乙醇后可能會(huì)產(chǎn)生白色沉淀，不會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
7、將步驟6所得溶液(包括形成的沉淀)全部加入到已裝入收集管的吸附柱，若一次不能加完溶液，可分多次轉(zhuǎn)入。12000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
8、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前檢查是否已加入無(wú)水乙醇)，12000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
9、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前檢查是否已加入無(wú)水乙醇)，12000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
注意：如需進(jìn)一步提高DNA純度，可重復(fù)步驟9。
10、12000rpm離心2分鐘，倒掉收集管中的廢液。將吸附柱置于室溫?cái)?shù)分鐘徹底晾干。
注意：這一步目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除，乙醇?xì)埩魰?huì)影響后續(xù)酶促反應(yīng)(酶切、PCR等)。
11、將吸附柱置于一個(gè)新離心管(自備)中，向吸附柱中間部位懸空加入50-200μl Buffer GE，室溫放置2-5分鐘，12000rpm離心1分鐘，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
1)如果下游實(shí)驗(yàn)對(duì)pH值或EDTA敏感，可以用滅菌水洗脫。洗脫液的pH值對(duì)洗脫效率有很大影響，若用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH將水的pH值調(diào)到此范圍)，pH值低于7.0時(shí)洗脫效率不高。
2)離心之前室溫孵育5分鐘可以增加產(chǎn)量。
3)用另外的50-200μl Buffer GE或滅菌水再次洗脫可以增加產(chǎn)量。
4)如果要提高DNA的終濃度，可以將步驟11所得的DNA洗脫液重新加至吸附膜上，重復(fù)步驟11；若洗脫體積小于200μl，可以增加DNA的終濃度，但可能會(huì)減少總產(chǎn)量。如果DNA的量小于1μg，推薦用50μl Buffer GE或滅菌水洗脫。
5)保存在水中的DNA會(huì)受到酸性水解作用影響，如需長(zhǎng)期保存，推薦用Buffer GE洗脫并于-20℃保存。

儲(chǔ)存條件：室溫(15～30℃)。

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