轉(zhuǎn)基因植物35S啟動子單重凝膠P由專業(yè)試劑供應(yīng)商北京百奧萊博提供，用于科研目的，我公司的轉(zhuǎn)基因植物35S啟動子單重凝膠P品質(zhì)上佳，經(jīng)過多年的開發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...

特別提示：包括轉(zhuǎn)基因植物35S啟動子單重凝膠PCR檢測試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：轉(zhuǎn)基因植物35S啟動子單重凝膠PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號：SYA276
產(chǎn)品規(guī)格：48次/盒



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貨號：SYA274
規(guī)格：48次/盒
本試劑盒適用于檢測植物中特異性基因Lectin，用于篩查待檢測植物中是否含有Lectin基因片段DNA成分。其檢測結(jié)果僅供參考。

本試劑盒用一對大豆特異性基因Lectin特異性引物，結(jié)合一條特異性熒光探針，用熒光PCR技術(shù)進行大豆特異性基因Lectin的檢測。

試劑盒組成：

組份	數(shù)量	規(guī)格
Lectin反應(yīng)液(Lectin-qPCR MIX)	1管	672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX)	1管	48μL/管
陰性對照(NTC)	1管	50μL/管
Lectin陽性對照(Lectin-PTC)	1管	50μL/管

儲存條件：-20℃，應(yīng)避免反復(fù)凍融，有效期12個月。

使用方法：

一、樣品采集及處理：
?適用標本類型：植物組織及其加工制品。
?樣本采集：稱取200g樣品。

二、DNA提取：
樣品需用粉碎機或冷凍研磨儀研磨至細粉末狀。
用戶可采用SN/T2584-2010中推薦的方法提取DNA，也可采購北京百奧萊博科技有限公司生產(chǎn)的植物基因組DNA提取試劑盒(過柱法)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品，并按照相應(yīng)試劑盒說明進行操作。
 注：陽性對照和陰性對照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取)，直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽性對照濃度較高，建議zuì后在樣品制備區(qū)域加入陽性對照。

三、檢測步驟：
1．PCR擴增
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(Lectin-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，室溫融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：

試劑	每個反應(yīng)加入的量	N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液	14μL	N×14μL
酶混合物	1 μL	N×1μL
總量	15μL	N×15μL

計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL，向每管中加入處理后樣品/陰性對照(NTC)/陽性對照(Lectin -PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
2．qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入實時熒光PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。推薦循環(huán)條件：

	1循環(huán)	50℃ for 2 min
預(yù)變性	1循環(huán)	95℃ for 10 min
PCR擴增	40循環(huán)	95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec

在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設(shè)置為FAM，淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

四、結(jié)果分析：
1．結(jié)果分析條件設(shè)定
直接讀取檢測結(jié)果。基線和閾值設(shè)定原則根據(jù)儀器噪聲情況進行調(diào)整，以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴增曲線的zuì高點為準。
2．試驗成立判定
?陰性對照(NTC)：不應(yīng)產(chǎn)生任何的擴增曲線。
?陽性對照(Lectin -PTC)：均產(chǎn)生擴增曲線。
?以上條件應(yīng)同時滿足，否則，此次試驗視為無效。
3．結(jié)果判定
?在試驗成立的條件下，Ct值≤35的樣本為陽性，表明Lectin核酸陽性。
?Ct值顯示為無的樣本為陰性樣本，表明Lectin核酸陰性。
?如果35＜Ct值≤40，判為可疑樣品。對于可疑樣品，先看擴增曲線。如果擴增曲線為對數(shù)擴增曲線，則為可疑陽性，否則判為陰性。
?對于可疑陽性樣品，重新抽提核酸，再次進行Lectin qPCR檢測。如果重復(fù)擴增曲線為對數(shù)擴增曲線，判為樣本陽性，表明Lectin核酸陽性；否則判為樣本陰性。

五、注意事項：
?初次使用前請仔細閱讀說明書。并嚴格按照說明書步驟操作。
?所有使用的離心管應(yīng)高壓滅菌，而且必須不含DNA酶。
?PCR操作應(yīng)嚴格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標本處理區(qū)、PCR擴增區(qū)等)，防止實驗室污染。
?樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺進行，以免污染。
?試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待，按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全通則》進行處理。

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