rRNA去除試劑盒（人/小鼠/大是高品質(zhì)的RNA提取純化產(chǎn)品，由北京百奧萊博供應，本產(chǎn)品用于生化實驗研究等領(lǐng)域，本品質(zhì)量穩(wěn)定，價位合理，需要rRNA去除試劑盒（人/小鼠/大等RNA提取純化產(chǎn)品的客戶，請到我公司官網(wǎng)聯(lián)系我們。...

特別提示：包括rRNA去除試劑盒（人/小鼠/大鼠)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：rRNA去除試劑盒（人/小鼠/大鼠)
英文名稱：rRNA Depletion Kit
產(chǎn)品貨號：WH0202
產(chǎn)品規(guī)格：6次|24次|96次

本試劑盒采用特殊設計的DNA探針與核糖體RNA（rRNA）雜交，隨后利用Ribo RNase H降解DNA-rRNA雜交鏈中的rRNA，從而去除人、小鼠、大鼠總RNA中的細胞質(zhì)核糖體RNA（28S、18S、5.8S、5S）和線粒體內(nèi)核糖體RNA（16S、12S），保留信使RNA（mRNA）和其它非編碼RNA。

該試劑盒對于完整和部分降解的總RNA（如FFPE RNA）均具有良好的rRNA去除效果，所獲得的去除了rRNA的RNA樣本可用于mRNA和非編碼RNA高通量測序，可顯著提高測序結(jié)果中有效數(shù)據(jù)比例，純化產(chǎn)物也可用于隨機引物cDNA合成或其它下游應用。

產(chǎn)品特點：
·樣本廣泛：適用于高質(zhì)量（完整）及部分降解（如FFPE）樣本中rRNA的去除。
·去除：有效去除95~99.9%的人/小鼠/大鼠的rRNA。
·數(shù)據(jù)：保留了不完整mRNA和非編碼RNA信息，使轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)更加。
·快速評估：試劑盒中提供的引物可快速評估rRNA的去除效果。

產(chǎn)品組成：

組分	6次	24次	96次
Ribo Hybridization Probe（H/M/R)	6μl	24μl	4×24μl
5×Hybridization Buffer	18μl	72μl	4×72μl
Ribo RNase H	6μl	24μl	4×24μl
5×RNase H Buffer	24μl	96μl	4×96μl
Ribo DNase I	6μl	24μl	4×24μl
10×DNase I Buffer	30μl	120μl	4×120μl
RNase-Free ddH2O	1ml	2×1ml	8×1ml
rRNA Primer Mix	12μl	48μl	4×48μl
mRNA Primer Mix	12μl	48μl	4×48μl

儲存條件：-20℃保存，保質(zhì)期為一年，盡量避免反復凍融。

注意事項：請務必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項。
1．操作過程請注意避免核酸樣品和產(chǎn)物之間的交叉污染。
2．請使用不含RNA酶或DNA酶的槍頭、離心管進行實驗。
3．實驗開始前，請清潔操作臺，建議使用RNA酶及DNA酶清除試劑處理臺面。確保沒有RNA酶和DNA酶的污染。

推薦使用的其他試劑：
1．去除rRNA的RNA純化：RNA Clean Beads （Cat#NG307)。
2．PCR檢測rRNA去除效率，QuickKing RT Kit （With gDNase)（Cat#KR116),SuperReal PreMix Plus（SYBR Green)（Cat#WH0103)。

操作流程示意圖：


操作步驟：

一、探針與rRNA雜交
1．在200μl Nuclease-Free PCR管中，用RNase-Free ddH2O將100~1000ng人/小鼠/大鼠的總RNA稀釋至11 μl，冰上放置備用。
  注意：總RNA樣品中應無DNA、鹽離子（例如Mg2+、胍鹽）、有機試劑（例如酚、乙醇）殘留，否則可能導致非預期的RNA降解或去除效率降低。
2．參照下表配制探針反應液：

成分	使用量
5×Hybridization Buffer	3μl
Ribo Hybridization Probe（H/M/R)	1μl

3．將步驟2的4 μl探針反應液加入到步驟1裝有11 μl RNA樣品的PCR管中，用移液器吸吹混勻10次。
4．瞬時離心，將樣品置于PCR儀中（啟用熱蓋99~105℃均可），按以下程序操作，總共耗時約20min。
  注意：必須慢速降溫（每秒降溫0.1℃)，使探針與rRNA充分雜交。

步驟	溫度	時間
1	95℃	2min
2	95 to 22℃	0.1℃/sec
3	22℃	5min hold

5．瞬時離心，并置于冰上，立即進入下步操作。

二、Ribo RNase H消化rRNA
1．參照下表在冰上配制Ribo RNase H反應液，并用移液器吸吹混勻10次。

成分	使用量
5×RNase H Buffer	3μl
Ribo RNase H	1μl

2．將5 μl Ribo RNase H反應液加入步驟一的產(chǎn)物中，構(gòu)成20 μl反應體系，用移液器吸吹混勻10次。
3．瞬時離心，將樣品置于PCR儀中（啟用熱蓋40℃），37℃孵育30 min。
4．瞬時離心，將樣品置于冰上，立即進入下步操作。

三、Ribo DNase I消化探針
1．參照下表在冰上配制Ribo DNase I反應液，并用移液器輕輕吸吹混勻10次。

成分	使用量
RNase-Free ddH2O	24 μl
10× DNase I Buffer	5 μl
Ribo DNase I	1 μl

2．將30 μl Ribo DNase I反應液加入步驟二的產(chǎn)物中，構(gòu)成50 μl反應體系，用移液器吸吹混勻10次。
3．瞬時離心，將樣品置于PCR儀中（啟用熱蓋40℃），37℃孵育30 min。
4．瞬時離心，將樣品置于冰上，立即進入下步操作。

四、RNA純化
推薦使用磁珠純化產(chǎn)品RNA Clean Beads（Cat#NG307)，也可使用Agencourt RNAClean XP（Beckman Coulter)。
1．渦旋振蕩混勻RNA Clean Beads，吸取110 μl （2.2倍體積）至步驟三的50 μlRNA產(chǎn)物，用移液器吸吹混勻10次。
2．冰上靜置15 min，使RNA充分結(jié)合到磁珠上。
3．將樣品置于磁力架上5 min，待溶液澄清后，用移液器小心移除上清。
4．保持樣品始終處于磁力架上，加入200μl新鮮配制的80%乙醇（每次實驗需要新鮮配制，因為乙醇易從空氣中吸收水分，濃度降低影響實驗效果）漂洗磁珠（不要吹散磁珠），室溫孵育30 sec，小心移除上清。
5．重復步驟4進行漂洗。
6．取出離心管短暫低速離心（<2000g,10 sec)，使液體收集至管底，將樣品放回磁力架，用移液器小心棄去所有液體。
7．保持樣品始終處于磁力架上，開蓋晾干磁珠3～5 min （不要過度干燥，否則可能降低RNA回收率。洗脫應當在磁珠依然顯深棕色且光亮，而且所有可見液體已完全揮發(fā)時進行。若磁珠出現(xiàn)裂縫，則表示已過度干燥）。
8．將樣品從磁力架上取出，加入12 μl RNase-Free ddH2O （或適合下游實驗的相應體積ddH2O或洗脫緩沖液），用移液器吹打10次混勻磁珠，室溫靜置2 min。
9．在磁力架上靜置2 min，待溶液澄清后，不要觸動磁珠，小心吸取10 μl上清（可根據(jù)步驟8選擇的實際洗脫體積進行相應調(diào)整，盡量充分利用洗脫產(chǎn)物）至新的Nuclease-Free PCR管。
10．洗脫樣品可立即用于RNA測序文庫構(gòu)建或其他分析應用，也可在-20℃保存過夜或在-80℃保存7天。

五、Real-time PCR檢測（可選步驟）
本試劑盒提供兩對定量PCR引物，分別為18S rRNA的rRNA Primer Mix和beta-actin的mRNA Primer Mix。建議以不進行處理的等量初始總RNA為對照（需用RNase-Free ddH2O或洗脫緩沖液稀釋至洗脫體積），以評估rRNA去除效率和mRNA損失比例。
兩步法舉例：逆轉(zhuǎn)錄用1μl的RNA產(chǎn)物作模板，合成鏈cDNA，然后定量PCR用2 μl cDNA作模板。試劑盒使用QuickKing RT Kit（With gDNase)（Cat#KR116)和SuperReal PreMix Plus （SYBR Green)（Cat#WH0103)。

根據(jù)您的關(guān)注的rRNA去除試劑盒（人/小鼠/大鼠)，核糖體RNA清楚試劑盒，核糖體RNA去除試劑盒，您可能還對以下產(chǎn)品有需求：



名稱：植物RNA柱式提取試劑盒
貨號：BTN71203
規(guī)格：50次
本試劑盒是植物RNA提取試劑盒(BTN3080)的柱式升級產(chǎn)品，它結(jié)合了BTN3080性(其效果在近五十多種各類植物中得到驗證，植物名單見BTN3080產(chǎn)品介紹的附錄)和百奧萊博柱式純化系列產(chǎn)品的快捷性。

試劑盒特點：
1. 操作更加簡單快速，處理一個樣品只需要約十分鐘，比植物RNA提取試劑盒快一倍。
2. RNA純度更高，平均 OD260/280一般都在2.0左右，能夠有效去除大多數(shù)植物中的多糖污染。
3.小RNA回收效率更高。
4.適用于所有用植物RNA提取試劑盒能提出RNA的植物(注:對有些植物可能需要在溶液A中額外添加RVC)。
5. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern雜交、cDNA合成等實驗。
6. 高于進口的柱式植物RNA提取產(chǎn)品。
7.一站式，提供RNase-free的樣品收集管。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
溶液A	50ml
溶液B	15ml
溶液C	50ml
離心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脫液	10ml
說明書	1份

注：溶液B為淡黃色液體，使用前請觀察顏色是否正常。若溶液B有油粒狀顆粒及分層，屬正?，F(xiàn)象，不影響使用。

儲存條件：常溫運輸，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 估算組織細胞的用量。每次微量提取一般需要100-200mg植物葉片、或50-100mg植物種子、或200-500mg植物果實。
2. 先將新鮮植物組織剪切成小塊(保存在RNAhold中的植物組織需用紙吸去RNAhold液體后再剪切成小塊)，放入10-15mL塑料離心管中，加入1mL溶液A，然后用勻漿器勻漿5-20秒。勻漿時會產(chǎn)生泡沫，但不影響提取效果。也可以使用液氮硯磨法破碎植物組織，硯磨完后加入1mL溶液A。注意：溶解溶液A沉淀。溶液A在4℃放置后可能會產(chǎn)生沉淀，使用前必須放在65℃水浴使沉淀徹底溶解并充分搖勻后再取用。
3. 將勻漿物或硯磨物轉(zhuǎn)移至干凈的1.5mL塑料離心管中(可以不必轉(zhuǎn)移非液體的細胞碎片)。有的植物組織(比如果實)含有大量水份，勻漿液會多于1mL，轉(zhuǎn)移時也只取1mL。
4.在離心管中加入0.3mL的溶液B和0.2mL自備lǜ仿，在振蕩器上振蕩30秒混勻，此時溶液呈均勻的乳濁狀。振蕩器振蕩時必須使管底溶液震蕩起來。
5.室溫12000～15000g離心3～5分鐘，兩相間將有約5-10毫米厚的細胞破碎物。
6. 將上清液(約0.6mL)轉(zhuǎn)移到另一干凈的1.5mL塑料離心管中，下層有機相和中間層含有DNA、蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì)，避免觸及或吸取。zuì好留下100μL上清液不取。
7. 加入等體積的溶液C，充分顛倒混勻。如果有沉淀產(chǎn)生(對某些植物，屬于正常現(xiàn)象)，千萬不要去掉沉淀，一定要把所有的混合物上柱。
8. 將一半的溶液(如果有沉淀，則先混勻)轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，13000-15000g室溫離心半分鐘，棄穿透液。
9. 將剩下的一半溶液(如果有沉淀，則先混勻)轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中，13000-15000g室溫離心半分鐘，棄穿透液。
10. 加0.7mL通用洗柱液，室溫離心半分鐘，棄穿透液。再加0.3mL通用洗柱液，室溫離心半分鐘，棄穿透液。一般樣品如此洗滌兩次即可，但如果在第7步加入溶液C后有沉淀產(chǎn)生，則需要洗三次，每次加入的通用洗滌液的量分別為0.4、0.3和0.3mL。
11.室溫離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的乙醇會影響RNA的使用。
12. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到RNase-free收集管中，加入50-100μl RNA洗脫液，室溫放置1-2分鐘。
13. 13000-15000g室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為RNA樣品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
14. RNA完整性的電泳檢測：如果需要做Northern雜交，強烈建議用戶使用甲醛變性膠進行RNA電泳，因為非變性膠不能分離所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
15. RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測定：將5-10μl RNA溶于TE緩沖液中(pH7.5-8.2之間)檢測其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出RNA濃度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，進而計算出RNA的產(chǎn)量(濃度×體積)和產(chǎn)率(RNA產(chǎn)量/組織用量)。
16. RNA純度測定：無污染的總RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染，但一般不影響RT-PCR等反應。

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貨號	名稱	規(guī)格
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BTN71202	血液RNA柱式提取試劑盒	50次
BTN160906	植物RNA提取試劑盒(無酚無lǜ仿柱式提取)	50次
BTN120503	藻類RNA柱式提取試劑盒	50次
BTN90404	植物RNA柱式提取試劑盒2.0	50次
BTN130971	柱式病毒RNA-DNA共提試劑盒	50次
BTN90203	miRNA分離純化試劑盒(沉淀法)	50次

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