RFT010 50bp plus DNA la

產(chǎn)品簡介
50bp plus DNA la是高品質(zhì)的核酸電泳和回收產(chǎn)品,由北京百奧萊博供應,本產(chǎn)品用于科學研究,我公司的50bp plus DNA la品質(zhì)上佳,經(jīng)過多年的開發(fā)生產(chǎn),已然非常成熟,歡迎廣大新老客戶訂購。...
產(chǎn)品詳細介紹
特別提示:包括50bp plus DNA ladder(50~1000bp)在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:50bp plus DNA ladder(50~1000bp)
產(chǎn)品貨號:RFT010
產(chǎn)品規(guī)格:100T(2×250μl)
本產(chǎn)品是由11條帶狀雙鏈DNA條帶組成的即用型DNA Ladder,適用于瓊脂糖凝膠電泳中DNA條帶的分析。含有1×loading buffer,可根據(jù)實驗需要,直接取2-5μl電泳,使用方便,電泳圖像清晰。11條帶包括50,100,150,200,250,300,350,400, 500, 600,1000bp,其中300bp條帶約為100ng/5μl,其余條帶濃度大約50ng/5μl。

使用方法:
1. 取2-5μl本產(chǎn)品加入到瓊脂糖凝膠的加樣孔中(每1mm×1mm加樣孔加1μl,如果加樣孔寬于5mm,可以適當增加上樣量)就行電泳。
2. 建議電泳條件:凝膠濃度為2.0-2.5%,凝膠長度6-7cm,電泳電壓4-10v/cm,電泳時間45-50分鐘。
3. 通過EB染色后紫外燈下觀察條帶。
注意事項:
1. 瓊脂糖的質(zhì)量對DNA的電泳有很大影響,電泳時請盡量使用質(zhì)量優(yōu)等的瓊脂糖。
2. 請使用新鮮配制的電泳緩沖液和新鮮配制的瓊脂糖凝膠進行電泳,以保證Marker良好的分離效果。
3. 如果凝膠中預先加入EB,電泳結束后紫外燈下觀察,200bp以下條帶亮度較弱,此問題可以通過凝膠后染的方法解決(即溶膠時不加EB,電泳結束后再進行EB染色)。
儲存條件:-20℃,有效期1年。
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名稱:50×TAE電泳液
貨號:BTN100211
規(guī)格:250mL
TAE Buffer全名為Tris-acetate-EDTA buffer,它主要用于DNA的瓊脂糖電泳。跟TBE相比,它的特點是不含硼酸,不會影響連接等后續(xù)酶反應。此外含低鹽,所以可用于研究鹽對DNA電泳速度的影響。但其緩沖能力低于TBE,反復使用的次數(shù)少于TBE。線性雙鏈DNA的泳動速度快于TBE。
儲存條件:常溫運輸及保存、有效期一年。
名稱:超快核酸電泳液(干粉)
貨號:BTN51210
規(guī)格:50L
SuperBuffer-2是我司在SuperBuffer基礎上開發(fā)的DNA/RNA 兩用快速電泳液。它跟SuperBuffer一樣,能以高達30 V/cm的電壓電泳,達到快速電泳的目的。跟SuperBuffer 不同的是,本產(chǎn)品對鹽離子濃度敏感度低,同時還能用于RNA電泳。
產(chǎn)品特點:
1.快速,電泳時間短,對分辨率要求不高的電泳(如PCR和酶切檢測等)甚至可以在5-10分鐘內(nèi)完成。
2. 不影響后續(xù)的Southern雜交,DNA膠回收和DNA連接等反應。
3. 價格與TBE(干粉)相當甚至更。
4. DNA膠回收率高于使用TAE和TBE電泳的膠回收。
儲存條件:常溫保存和運輸,有效期兩年。
使用方法:
一:溶液的配制
將本產(chǎn)品全部加到一個干凈的容量適當?shù)娜萜髦?,按下表的用量加入蒸餾水并在室溫下用磁力攪拌器攪拌,直到干粉完全溶解(一般需要30分鐘左右)。
配法一(配制20X濃縮液):加2.5升得到20×工作液
配法二(直接配制工作液):加水50升得到50×工作液
注:其他濃度的濃縮液配制可以按比例計算,但濃縮液濃度不能超過20×,否則干粉不能全部溶解。由于干粉含多種未徹底混合均勻的成份,所以必須一次性全部用于溶液的配制。如果緩沖液(濃縮液或工作液)長時間不用,zuì好滅菌后放4℃長期保存。
二:DNA電泳
將SuperBuffer-2濃縮液用蒸餾水稀釋到1×,除了需要使用較高電壓才能得到快速的電泳結果外,操作跟使用TAE和TBE基本一樣。需注意的地方是:
1.電壓:在SuperBuffer-2溶液中既可以使用常規(guī)電壓,也可以使用較高電壓,只是使用常規(guī)電壓時,其快速的優(yōu)越性就體現(xiàn)不出來。使用較高電壓時,由于各電泳槽結構不同,zuì佳電壓需要稍做摸索。次zuì好將工作電壓調(diào)到zuì高電壓的80%左右,即平均25 V/cm(電距離)。對一般minigel,一般可以用250-350V 跑5-10分鐘;對大的電泳槽,可用400-450V 跑5-10分鐘。每次根據(jù)電泳結果和緩沖液溫度決定各電泳槽的zuì佳工作電壓和時間。一般電壓越高,電泳時間越短。若在電泳時發(fā)生電流或電壓逐漸下降的現(xiàn)象,請檢查電泳儀是否設置了電流上限或功率上限。緩沖液電泳次數(shù)超過3次或緩沖液中有細菌/真菌生長也會出現(xiàn)此現(xiàn)象,需要更換新的緩沖液。
2.膠濃度:建議將瓊脂糖凝膠的濃度控制在0.8%左右,對于長度在100bp以下的DNA片段,可以將瓊脂糖凝膠的濃度提高到1.2%左右。由于每次溶膠過程中會丟失水份,所以zuì好在溶膠后適當補充水份(可以前后稱重),否則膠濃度會逐漸增加,DNA的移動速度會減低、產(chǎn)熱會增加。使用0.8%左右的瓊脂糖凝膠的好處是一方面可以節(jié)約膠的用量,另一方面可以使DNA的泳動速度更快,同時還能夠提高DNA的回收率。
3.染色:如果使用EB,zuì好把染料加入到融化后的凝膠中(只是EB的終濃度zuì好為0.4 -0.5μg/mL,比使用TAE和TBE時稍高),但也可以加入到電泳緩沖液中或/和電泳上樣液中。如果使用百奧萊博低毒染料綠如藍,zuì好將染料加入到融化后的凝膠中。如果只有膠中有染料,則長時間電泳后(超過20分鐘),大部分染料在高壓下會與DNA 分離,DNA 條帶可能會看不見或看起來很淡,此時應該再染色一次。在染色液中加入一定的量的NaCl(終濃度≥0.05 mol/L)能提高染色效果。SuperBuffer-2與SYBR Green I 也有良好的兼容性,可以結合使用。
4. DNA 條帶扭曲:DNA樣品中所含SDS 量過高時(SDS 主要來于上樣液),DNA條帶將出現(xiàn)扭曲,影響實驗效果。建議使用不含SDS的上樣液。
5. 反復使用:1×SuperBuffer-2電泳液至少可以重復使用2-3次,如果使用大電泳槽,可以重復使用的次數(shù)會更多。
6. TAE和TBE膠:已經(jīng)用TAE和TBE電泳液配置好的瓊脂糖凝膠可以直接放入1× SuperBuffer-2電泳液中按上述電泳條件電泳,但有時候會有扭曲現(xiàn)象。
三:RNA電泳
跟DNA電泳一樣,必須在使用前用水將SuperBuffer-2溶液稀釋到1×,其使用方法跟DNA電泳的主要區(qū)別是:
1.電壓:RNA電泳時,zuì高使用電壓大約只有DNA zuì高使用電壓的一半左右,所以一般minigel可以使用150 V左右的電壓。由于各實驗室電泳槽規(guī)格各異,次電泳時,zuì好將工作電壓調(diào)到跟MOPS電泳一樣的電壓,每次再逐漸往上調(diào)電壓和時間,根據(jù)電泳結果和測定緩沖液的溫度決定今后的工作電壓。
2. RNA上樣液:RNA必須與含變性劑的RNA上樣液混合,并在80℃保溫10分鐘后冰浴2-5分鐘再上樣。不能直接將RNA樣品上樣或使用DNA上樣液,否則電泳不但很難得到清晰的條帶,并且在加樣孔中還會有看似DNA污染的條帶出現(xiàn)。推薦使用百奧萊博生產(chǎn)的RNA變性/上樣/染色三合一即用型溶液RNAload。
3.膠濃度:RNA電泳zuì好使用1%-1.5%的瓊脂糖凝膠,用1X SuperBuffer-2配制。
4.染色:同DNA電泳。
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