YTM 總RNA抽提試劑由專業(yè)試劑供應(yīng)商北京百奧萊博提供，用于科研目的，我公司的YTM 總RNA抽提試劑品質(zhì)上佳，經(jīng)過多年的開發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...

特別提示：包括YTM 總RNA抽提試劑(Trizol法)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：YTM 總RNA抽提試劑(Trizol法)
英文名稱：Total RNA Extraction Reagent(Trizol Method)
產(chǎn)品貨號：YT526
產(chǎn)品規(guī)格：100ml

本試劑是一種用于動植物細胞或組織及細菌總RNA抽提的試劑。本產(chǎn)品采用和Invitrogen公司的TRIzol完全相似的原理和方法，抽提的方法和步驟完全相同。本試劑的顏色和TRIzol相同，加入氯fǎng后上層呈無色，下層呈紫紅色，便于吸取上層水相。

本試劑可以抽提長達15 kb的RNA，也可以抽提microRNA等小RNA。抽提小RNA時宜-70℃沉淀過夜。抽提所得RNA無DNA和蛋白污染。一般所得RNA溶于DEPC水后的A260/280值為1.8-2.0。裂解細胞或和組織共勻漿時，本試劑可以保持樣品中RNA的完整性，即可以有效抑制RNA的降解。每一百萬細胞用本試劑抽提可得5-15μg RNA；每毫克組織用本試劑抽提可得1-10μg RNA。產(chǎn)量因細胞和組織不同而異。每100ml 本試劑可以抽提100個六孔板中的樣品或100個50-80mg的組織樣品。抽提兩個樣品約需一小時。

本試劑抽提所得RNA可直接用于Northern，點雜交，純化mRNA，體外翻譯，RNase protection assay，cDNA克隆，以及RT-PCR；也可以用于基因表達芯片分析、高通量測序(deep sequencing)等對RNA質(zhì)量要求較高的情況。

百奧萊博的本試劑(YT526)和Trizol(YT527)的成分有細微差別，實際抽提效果無任何顯著差異。

注意事項：
1. 需自備氯fǎng，異丙醇，DEPC，75%乙醇(DEPC水配制)，和DEPC水。DEPC水(YT528)可向百奧萊博訂購。
2. 所有離心管，槍頭及相關(guān)溶液都必須無RNA酶污染。耐高溫器物可150℃烘烤4小時以去除RNA酶，其它器物去除RNA酶可考慮用0.01%的DEPC水浸泡過夜，然后滅菌，烘干。溶液需用DEPC水配制。加0.01%(體積比) diethylpyrocarbonate(DEPC)至重蒸水或Milli-Q級水中，處理過夜，滅菌即成DEPC水。
3. 使用凍存的細胞或組織抽提總RNA的效果通常比新鮮的細胞或組織差一些。因為在細胞或組織凍融過程中一些細胞或組織內(nèi)的RNase會被釋放出來并剪切樣品。如果不能及時抽提RNA，推薦先加入適量本試劑，并裂解樣品后凍存。
4. 必須戴一次性手套操作，且盡量不要對著RNA樣品呼氣或說話，以防RNA酶污染。建議戴一次性口罩操作。
5. 本試劑含有毒物質(zhì)苯酚，避免接觸皮膚或吸入。為防止濺入眼睛，請戴防護眼鏡或使用透明保護屏。如皮膚接觸本試劑，請立即用大量去垢劑和水沖洗，如仍有不適，請聽取醫(yī)生意見。
6. 本試劑抽提總RNA的同時，理論上也可抽提蛋白和DNA，但未經(jīng)測試。有興趣者可按Invitrogen公司的TRIzol的操作步驟進行操作。

儲存條件：4℃，有效期一年。

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名稱：動物RNA提取試劑盒(柱式Trizol)
貨號：BTN71201
規(guī)格：50次
本試劑盒是動物總RNA快速提取試劑動物RNA提取試劑盒(BTN3070)的柱式升級產(chǎn)品，可用于從各種動物組織(包括白細胞)快速提取總RNA。

試劑盒特點：
1. 操作更加簡單快速，整個過程只需要不到十分鐘(對一個樣品而言)。
2. RNA 純度更高，OD260/OD280一般在2.0左右。
3.一般不含用RT-PCR可以檢測到的基因組DNA污染。
4.適用于培養(yǎng)細胞、大部分動物組織和部分植物組織。
5. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern雜交、cDNA 合成等實驗。
6. 高于進口的柱式RNA提取產(chǎn)品。

試劑盒組成：

成分	50T
溶液A	50ml
溶液B	25ml
離心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA 洗脫液	10ml
說明書	1份

儲存條件：常溫運輸，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
下面的操作步驟是針對在1.5mL塑料離心管中進行的微量提取的，如果處理樣品量大，請按比例增加各成份的用量并使用大的離心管和離心機。

1. 根據(jù)組織細胞類型的不同分為下面及種情況使用：
a)對貼壁細胞：吸盡培養(yǎng)液，在每10 平方厘米細胞中加入1mL溶液A，用槍輕柔吹打數(shù)次，確保細胞全部裂解。
b)對懸浮細胞：離心收集細胞，吸盡液體，在每1-5×106 懸浮細胞中加入1mL溶液A，用槍輕柔吹打數(shù)次，確保細胞全部裂解。如果是fibroblasts或carcinoma cell，1mL溶液A的細胞使用量不要超過1×106個細胞。
c)對新鮮組織：先將剪切成小塊新鮮組織或液氮保存的組織放入10mL或15mL塑料離心管中，每50-100mg 組織加1mL溶液A，用勻漿器勻漿30秒左右。對肝、脾、胰、腎等細胞分裂十分旺盛的組織(細胞中含大量正在復(fù)制的DNA)，建議組織的使用量不要超過50mg/ mL溶液A，否則十分容易產(chǎn)生DNA污染。
d)對RNAhold 保存組織：先用紙吸去RNAhold液體后再剪切成小塊，其余操作同新鮮組織的處理。
2. 將裂解物轉(zhuǎn)移至一個干凈的1.5mL塑料離心管中，然后加入0.2倍體積的自備氯fǎng(1mL溶液A需0.2mL 氯fǎng)，振蕩器上充分振蕩混均30秒。
3. 12000rpm室溫離心3～5分鐘。
4. 將上清液(約0.6-0.8mL的無色透明水相，有時水相比重大時，水相在下層，有機相即藍相在上層，吸取時應(yīng)吸取透明水相)轉(zhuǎn)移到一個干凈的1.5mL塑料離心管中。注意：離心后下層有機相和中間層含有DNA和蛋白質(zhì)，避免觸及，否則將產(chǎn)生蛋白質(zhì)和DNA污染。為保險起見，可以留下100μl上清液不取。同時吸取上清時zuì好緩慢進行，否則容易吸出交界面的不可見的絲狀DNA。
5. 加入等體積的溶液B，充分顛倒混勻。
6. 將一半的溶液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，12000rpm室溫離心半分鐘，棄穿透液。
7. 將剩下的一半溶液轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中，12000rpm室溫離心半分鐘，棄穿透液。
8. 加0.7mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，室溫離心半分鐘，棄收集管中的穿透液。一次洗滌一般足夠去除雜質(zhì)。
9. 加0.3mL 通用洗柱液，室溫離心半分鐘，棄穿透液。此步可以省略。
10.室溫12000 rmp離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的通用洗柱液會影響RNA的使用。
11. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到一自備的RNase-free 收集管中，加入50-100μL RNA 洗脫液。
12.室溫12000 rmp離心半分鐘，離心管中溶液即為RNA樣品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
13. RNA的電泳檢測：本試劑盒提取的RNA zuì好用甲醛變性膠電泳，如果在非變性的普通瓊脂糖膠(in TAE或TBE buffer)上電泳，一定要使用RNA 專用上樣液RNAload(操作詳見RNAload 使用手冊)，千萬不要使用常用的DNA上樣液，因為DNA上樣液沒有經(jīng)過去RNase處理，也不能將RNA變性，得到的帶型將十分雜亂。
14. RNA 完整性的電泳檢測：如果需要做Northern雜交，強烈建議用戶使用甲醛變性膠進行RNA電泳，因為非變性膠不能分離所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
15. RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測定：將5-10μl RNA 溶于TE緩沖液中(pH7.5-8.2 之間)檢測其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出RNA濃度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，進而計算出RNA的產(chǎn)量(濃度×體積)和產(chǎn)率(RNA產(chǎn)量/組織用量)。
16. RNA 純度測定：無污染的總RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1 之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染，但一般不影響RT-PCR等反應(yīng)。

疑難解答：
Q：上樣孔里的紅色熒光物一定是DNA污染嗎？
A：不是。用TAE或TBE電泳液和非變性膠電泳RNA時容易產(chǎn)生此現(xiàn)象，我們初步研究發(fā)現(xiàn)大部分紅色熒光物是變性不充分的單鏈RNA通過堿基互補或通過硼酸絡(luò)合(如果使用TBE作電泳液的話)形成的復(fù)合物，加RNase處理后，這些紅色熒光物(RNA)一般會消失。為避免此現(xiàn)象，建議zuì好使用甲醛變性膠電泳和RNA 專用上樣液(如RNAload)。
Q：如何確認和去處除污染的基因組DNA？
A：如果懷疑有DNA污染，可以用RNase處理RNA樣品，然后再電泳。如果上樣孔里的紅色熒光物不消失，則表示是基因組DNA污染。進一步確認可以使用PCR擴增法。去除污染的DNA可以使用百奧萊博的非酶的DNA去除劑DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有殘留的RNase污染，所以必須嚴格按照廠家提供的使用說明書進行操作。

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貨號	名稱	規(guī)格
BTN101109	糞便RNA柱式提取試劑盒	50次
BTN71202	血液RNA柱式提取試劑盒	50次
BTN3290	RNase抑制劑(人源)(40U/μL)	2500U
BTN130699	RNase抑制劑(小鼠源)(40U/μL)	3000U
BTN10080	水飽和酚-氯fǎng-異戊醇混合液(RNA提取用)	250mL
WE0404	RNA樣本保存液	100ml|500ml

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