HR0257-50T 酵母線粒體提取試劑盒
- 產(chǎn)品/服務(wù)：HR0257-50T 酵母線粒體提取試劑盒
- 型 號(hào)：HR0257-50T
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價(jià)：面議
- 更新日期：2023-08-28
- 有效期至：長(zhǎng)期有效
- 瀏覽次數(shù)：1122
線粒體是真核細(xì)胞中產(chǎn)生能量的重要細(xì)胞器。細(xì)胞中的能源物質(zhì)—脂肪、糖、部分氨基酸在此進(jìn)行最終的氧化,并通過(guò)偶聯(lián)磷酸化生成ATP,供給細(xì)胞生理活動(dòng)之需。對(duì)線粒體結(jié)構(gòu)與功能的研究通常是在離體的線粒體上進(jìn)行的。...
酵母線粒體提取試劑盒
產(chǎn)品編號(hào)：HR0257
產(chǎn)品組成：
|
組份 |
50T |
100T |
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試劑A：酵母線粒體提取液A |
20mL |
40mL |
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試劑B：酵母線粒體提取液B |
25mL |
50mL |
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試劑C：酵母線粒體提取液C |
20mL |
40mL |
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試劑D：酵母洗滌液D |
50mL |
100mL |
|
試劑E：線粒體保存液E |
20mL |
40mL |
保存條件：
2-8℃保存；酵母洗滌液長(zhǎng)期不用時(shí)-20℃保存。有效期1年。
酵母線粒體提取試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明：
線粒體是真核細(xì)胞中產(chǎn)生能量的重要細(xì)胞器。細(xì)胞中的能源物質(zhì)—脂肪、糖、部分氨基酸在此進(jìn)行最終的氧化,并通過(guò)偶聯(lián)磷酸化生成ATP,供給細(xì)胞生理活動(dòng)之需。對(duì)線粒體結(jié)構(gòu)與功能的研究通常是在離體的線粒體上進(jìn)行的。
本產(chǎn)品提供全套試劑,適用于從各種酵母樣品中提取線粒體。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便。
本試劑盒不能用于冷凍樣品的線粒體提取。
試劑盒以外自備試劑和儀器：
● 離心機(jī) ● 振蕩器 ● 渦旋混勻器 ● PBS緩沖液
酵母線粒體提取試劑盒使用注意事項(xiàng)：
● 旋帽離心管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底,避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。
● 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。
使用方法：
1、酵母培養(yǎng)物,在4℃,1000×g條件下離心5-10分鐘,小心吸取培養(yǎng)基,盡可能吸干,收集酵母沉淀。
2、用PBS洗滌酵母兩次,每次洗滌后盡可能吸干上清。
【注】：
● 在1000×g離心5分鐘。
3、每100μL體積或100mg濕重酵母沉淀物中加入400μL酵母線粒體提取液A,混勻后,在30℃條件下保溫15 分鐘。
【注】：
● 酵母數(shù)量根據(jù)實(shí)驗(yàn)情況調(diào)整,每次的裂解液用量并不是一定的,請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整。
4、在1000×g條件下離心5-10分鐘,收集酵母沉淀。
5、用300μL酵母洗滌液D洗滌酵母一次,離心收集酵母。
6、酵母沉淀物中加入500μL酵母線粒體提取液B,充分混勻。
【注】：
● 根據(jù)酵母細(xì)胞量調(diào)整提取液用量,一般加菌體體積的2-5倍均可。
● 按酵母菌體體積每100μL或100mg濕重菌體加入250-500μL提取液。
7、在37℃或室溫條件下輕微振蕩60-90分鐘。
【注】：
● 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速,提取液能輕微晃動(dòng)即可。
● 如果沒(méi)有振蕩條件也可以不振蕩,稍微延長(zhǎng)提取液的處理時(shí)間,中間每隔10分鐘用移液器吹打混勻。
● 不用酵母樣本需要的時(shí)間差異較大,根據(jù)下游細(xì)胞裂解的難易程度調(diào)整,如果下游試劑C處理后沉淀沒(méi)有明顯減少,需要延長(zhǎng)此步驟處理時(shí)間?？梢匝娱L(zhǎng)至2小時(shí)。
8、在2000×g條件下離心5-10分鐘,棄上清,收集沉淀。
9、沉淀用300μL酵母洗滌液D洗滌兩次。離心收集沉淀。
10、在沉淀中加入400μL酵母線粒體提取液C,充分混勻,然后在振蕩器上振蕩10-30分鐘。
【注】：
● 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速,保持提取液能輕微晃動(dòng)即可。
● 如果沒(méi)有振蕩器的話,在4℃靜置,稍微延長(zhǎng)處理時(shí)間,中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。
● 試劑C處理后沉淀應(yīng)減少,否則延長(zhǎng)處理時(shí)間。
11、在4℃,500×g條件下離心5分鐘。棄沉淀,收集上清。
12、將上清吸入另一干凈離心管。
13、在4℃,12000×g以上條件下離心20分鐘。棄上清,收集沉淀。
14、在沉淀中加入400μL線粒體保存液E,混勻。
15、在4℃,12000×g條件下離心20分鐘,棄上清,收集沉淀。即得到酵母線粒體樣品。
16、根據(jù)下游實(shí)驗(yàn)需要,將沉淀用相應(yīng)的緩沖液重懸。置冰箱備用或直接用于下游實(shí)驗(yàn)。
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