DNA退火緩沖液(5×)是高品質(zhì)的核酸擴(kuò)增(PCR)產(chǎn)品，由北京百奧萊博供應(yīng)，本產(chǎn)品用于生化實(shí)驗(yàn)研究等領(lǐng)域，我公司的DNA退火緩沖液(5×)品質(zhì)上佳，經(jīng)過多年的開發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...

特別提示：包括DNA退火緩沖液(5×)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：DNA退火緩沖液(5×)
產(chǎn)品貨號(hào)：GL1300
產(chǎn)品規(guī)格：1ml

用途：
用于DNA oligo退火的緩沖液

注意事項(xiàng)：
無菌溶液。主要由氯化鉀、Tris、氯化鎂等組成，經(jīng)高壓滅菌處理。

儲(chǔ)存條件：-20℃，12個(gè)月

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貨號(hào)	名稱	規(guī)格
BTN130815	taq酶抗體	500U
BTN70902	5M甜菜堿溶液，PCR級(jí)	1.5mL
YT400	核酸酶清除劑(核酸酶噴霧清除劑)	250ml
WE0150	一步法逆轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒(高含量ROX校正染料)	100次
RFT160	5M甜菜堿溶液(PCR級(jí))	5×1ml
JN0029	BloTaq血液DNA聚合酶	400U

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名稱：可逆型Taq DNA聚合酶抑制劑
貨號(hào)：BTN60901
規(guī)格：0.3mL
Taq DNA聚合酶是進(jìn)行PCR的zuì常用工具酶，但是由于它在常溫下還是具有部分活性，所以經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)非特異的擴(kuò)增產(chǎn)物，尤其是當(dāng)PCR反應(yīng)體系中有大量非特異DNA存在的時(shí)候。目前zuì常見的解決方法是使用抗Taq DNA聚合酶的抗體和使用經(jīng)過化學(xué)修飾的熱啟動(dòng)Taq DNA聚合酶(如AmpliTaq Gold)，但前者的缺點(diǎn)是加熱后抗體會(huì)不可逆失活，后者的缺點(diǎn)是需要預(yù)熱處理使酶激活。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1.可逆抑制Taq DNA聚合酶的活性，即常溫抑制Taq酶活性，在45℃以上抑制功能喪失，當(dāng)溫度降低到45℃以下后，抑制活性又得以恢復(fù)。
2. 耐熱，產(chǎn)品本身為非蛋白質(zhì)試劑，遠(yuǎn)比Anti-Taq抗體穩(wěn)定，便于保存和運(yùn)輸。
3. 使用簡單，在加Taq酶前將本產(chǎn)品按PCR反應(yīng)體積的1/10直接加入即可。
4.適用范圍廣，除Taq DNA聚合酶外，還可用于抑制其他DNA聚合酶的活性，如：Tth pol、Stoffel片段、Tfl pol、Tbr pol等。而一種酶的抗體一般對另一種酶的活性沒有抑制作用。
5.與后續(xù)的RT-PCR兼容。

儲(chǔ)存條件：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
在加入Taq或Tth DNA聚合酶之前，按PCR反應(yīng)終體積1/10的比例將本產(chǎn)品加入到反應(yīng)體系中混勻，然后再加入DNA聚合酶，啟動(dòng)PCR反應(yīng)。

名稱：即用型易錯(cuò)PCR試劑盒
貨號(hào)：BTN101005
規(guī)格：100次
本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進(jìn)行易錯(cuò)PCR而開發(fā)。易錯(cuò)PCR是利用Taq DNA多聚酶不具有3′→5′校對功能的特性，在一定條件下(如不同的dNTP濃度、Mg濃度和MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法，則可從構(gòu)建的突變庫選出所需突變體。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. 即開即用，十分簡單方便，尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的優(yōu)越性。
2. 配方經(jīng)過精心優(yōu)化，突變率穩(wěn)定，突變沒有趨向性。易錯(cuò)PCR的突變率為0.66%(±0.13%)，詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡單，但如果在PCR引物中設(shè)計(jì)位點(diǎn)，則可使產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體，也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4.可用于連續(xù)易錯(cuò)PCR，只需把上一次易錯(cuò)PCR的產(chǎn)物用作下一次易錯(cuò)PCR的模板即可，使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴(kuò)增1kb以下的產(chǎn)物，對于1kb以上的產(chǎn)物，建議分段擴(kuò)增。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
Taq DNA聚合酶(5U/μL)	100μl
易錯(cuò)PCR Mix，10×	300μl
易錯(cuò)PCR專用dNTP，10×	300μl
MnCl2，5mM	300μl
說明書	1份

儲(chǔ)存條件：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期為一年。

使用方法：
1.以30μL的標(biāo)準(zhǔn)PCR反應(yīng)體系為例，如果反應(yīng)體系不是30μL，各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的PCR管中，加入下列成分：

易錯(cuò)PCR Mix,10×	3μl
易錯(cuò)PCR 專用dNTP，10×	3μl
MnCl2，5mM	3μl
自備DNA模板(10ng/μL)	1μl
PCR引物(自備，10μm each)	10pmol each
Taq DNA聚合酶(5U/μL)	1-5U
補(bǔ)水到	30μl

2. 按已經(jīng)優(yōu)化的PCR條件進(jìn)行一定循環(huán)數(shù)的PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見下表)，然后取5μL電泳檢查。如果沒有優(yōu)化的PCR條件，一般可以先嘗試下面的PCR條件：

PCR前變性	94℃ 3分鐘
易錯(cuò)PCR	94℃ 1分鐘	循環(huán)30次(見注)
	45℃ 1分鐘
	72℃ 1分鐘

注：易錯(cuò)PCR一般不需要熱啟動(dòng)，也不需要在PCR結(jié)束后做延伸處理。

循環(huán)次數(shù)與突變幾率的關(guān)系
易錯(cuò)PCR循環(huán)次數(shù)決定每個(gè)核苷酸位置的突變幾率，進(jìn)而決定每個(gè)PCR產(chǎn)物可能得突變位點(diǎn)數(shù)，所以所需循環(huán)數(shù)由客戶根據(jù)需要改動(dòng)。

PCR循環(huán)數(shù)	每個(gè)堿基突變幾率	PCR終產(chǎn)物中的突變位點(diǎn)數(shù)
		100bp	200bp	400bp	800bp	1600bp
5	0.0033	0.00	0.66	1.3	2.6	5.3
10	0.0066	0.66	1.3	2.6	5.3	11
20	0.013	1.3	2.6	5.3	11	21
30	0.020	2.0	4.0	7.9	16	32
50	0.033	3.3	6.6	13	26	53

3.電泳檢測是否得到預(yù)計(jì)長度的PCR產(chǎn)物。

疑難解答：
Q：易錯(cuò)PCR與定點(diǎn)突變PCR有什么區(qū)別？
A：定點(diǎn)突變是指通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)等方法向目的DNA片段(可以是基因組，也可以是質(zhì)粒)中引入所需變化(通常是表征有利方向的變化)，包括堿基的添加、刪除、點(diǎn)突變等。它需要預(yù)先知道靶基因的序列。易錯(cuò)PCR是一種隨機(jī)突變，它不需要預(yù)先知道靶基因的序列(引物結(jié)合部分除外)，但需要后續(xù)的篩選方法篩選自己所需要的突變。
Q：易錯(cuò)PCR的錯(cuò)誤率是多少？
A：易錯(cuò)PCR的突變率為0.66%(±0.13%)，對500bp的PCR產(chǎn)物，相當(dāng)于有4%的PCR片段為野生型，12%的含一個(gè)突變，20%的含兩個(gè)突變，22%的含三個(gè)突變，18%的含四個(gè)突變，12%的含五個(gè)突變，12%的含六個(gè)或更多突變。
Q：如果需要每個(gè)核苷酸有高于0.66%的突變率，如何辦？
A：可以使用連續(xù)多次易錯(cuò)PCR來提高突變率。但zuì好先用膠純化回收PCR片段,再用于下一輪PCR。此外不能用少于千分之一的次PCR產(chǎn)物作為第二輪易錯(cuò)PCR的模板，否則多樣性將受到影響。第三輪易錯(cuò)PCRzuì好使用所有第二輪的PCR產(chǎn)物作為模板，但需要在10mL體系中完成(可以分成很多100μL體系進(jìn)行)。

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