PCR級海藻糖溶液由專業(yè)試劑供應(yīng)商北京百奧萊博提供，用于科學(xué)研究，我公司的PCR級海藻糖溶液品質(zhì)上佳，經(jīng)過多年的開發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...

特別提示：包括PCR級海藻糖溶液在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：PCR級海藻糖溶液
英文名稱：Trehalose Solution，PCR Grade
產(chǎn)品貨號：BTN130506
產(chǎn)品規(guī)格：1.5mL

本產(chǎn)品為濃度為5M的海藻糖的水溶液，可以直接添加到PCR反應(yīng)體系或逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中提高酶的熱穩(wěn)定性和活性。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1.在反應(yīng)體系中加入海藻糖，可以增加熱敏感的酶在高溫下的穩(wěn)定性和活性。
2. 海藻糖能增加鼠白血病病毒逆轉(zhuǎn)錄酶(Reverse Transcripatase)的熱穩(wěn)定和熱激活特性，使其在60℃仍具有全部活性，足以在mRNA二級結(jié)構(gòu)誘導(dǎo)終止反應(yīng)之前合成全長的cDNA，反應(yīng)效率大大提高。
3. 有助于提高干燥保存的酶的活性。

儲存條件：低溫運(yùn)輸，4℃保存，保存期一年

使用方法：按照1/3體積，將本產(chǎn)品加入到PCR體系中即可。

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貨號	名稱	規(guī)格
BTN61203	PCR級高GC的DNA清除劑	1.5mL
BTN91106	T7體外轉(zhuǎn)錄試劑盒	50次
WE0108	2×Pfu MasterMix(含染料)	5ml
WE0120	血液直接PCR擴(kuò)增試劑盒	50μl×40次|50μl×200次
WE0124	多重PCR Mix	1ml|5ml
WE0130	Real-time RT-PCR MasterMix	100次

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名稱：可調(diào)式易錯(cuò)PCR試劑盒
貨號：BTN160903
規(guī)格：100次
易錯(cuò)PCR是利用Taq DNA多聚酶不具有3′→5′校對功能的特性，在一定條件下(如不同的dNTP濃度、Mg濃度和MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法，則可從構(gòu)建的突變庫選出所需突變體。易錯(cuò)PCR和常規(guī)PCR的比較如下：


產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. 即開即用，十分簡單方便，尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的優(yōu)越性。
2. 配方經(jīng)過精心優(yōu)化，實(shí)驗(yàn)人員在一定范圍內(nèi)可以控制突變率，一輪PCR的突變率范圍在2-8突變/1000bp，更高的突變率可以通過多輪PCR達(dá)到。
3.可用于連續(xù)易錯(cuò)PCR，只需把上一次易錯(cuò)PCR的產(chǎn)物用作下一次易錯(cuò)PCR的模板即可，使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
4.可以擴(kuò)增的DNA片段更長，達(dá)到3kb，對于3kb以上的產(chǎn)物，建議分段擴(kuò)增。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
Taq DNA聚合酶(5U/μL)	100μl
易錯(cuò)PCR專用dNTP 2.0,10×	300μl
易錯(cuò)PCR Mix 2.0,10×	300μl
易錯(cuò)PCR專用MnCl2	300μl
易錯(cuò)PCR專用dGTP	300μl
超純水	1ml

儲存條件：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期為一年。

使用方法：

1. 將模板DNA稀釋到1ng/uL。將引物稀釋到10uM。
 注意：引物是決定易錯(cuò)PCR成敗的關(guān)鍵因素，設(shè)計(jì)引物時(shí)要保證其Tm在70℃，長度在25-30nt之間，GC含量在45%-60%之間，3端GC含量低，并且沒有發(fā)夾結(jié)構(gòu)。
2. 根據(jù)每1000bp的預(yù)期突變數(shù)按下表確定易錯(cuò)PCR的反應(yīng)條件中MnCl2和dGTP的用量。表中的A表示易錯(cuò)PCR專用的MnCl2，B表示易錯(cuò)PCR專用的dGTP：

預(yù)期突變數(shù)	2個(gè)	3個(gè)	4個(gè)	5個(gè)	6個(gè)	7個(gè)	8個(gè)
A的用量(μl)	0	1.0	2.5	4.0	4.0	4.0	4.0
B的用量(μl)	0	0	0	1.0	2.0	3.0	4.0

3.以30μL的標(biāo)準(zhǔn)PCR反應(yīng)體系為例，如果反應(yīng)體系不是30μL，各成分需要按等比例增加或減少。在一干凈的PCR管中，加入下列成分
 注意：可以先計(jì)算出超純水的用量，優(yōu)先加水

成分	用量
超純水	根據(jù)第2步加
易錯(cuò)PCR Mix,10×	3μl
易錯(cuò)PCR 專用dNTP，10×	3μl
易錯(cuò)PCR 專用MnCl2	根據(jù)上步
易錯(cuò)PCR 專用dGTP	根據(jù)上步
自備DNA模板(1ng/μl)	1μl
自備PCR引物(10μM each)	1μl each
Taq DNA聚合酶(5U/μl)	1μl

4. 按已經(jīng)優(yōu)化的PCR條件進(jìn)行一定循環(huán)數(shù)的PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見下表)，然后取5μL電泳檢查。如果沒有優(yōu)化的PCR條件，一般可以先嘗試下面的PCR條件(對1Kb長的模板而言)：

PCR前變性	94℃ 3分鐘
易錯(cuò)PCR(循環(huán)30次)	94℃ 1分鐘
	45℃ 1分鐘
	72℃ 1分鐘

注：易錯(cuò)PCR一般不需要熱啟動(dòng)，也不需要在PCR結(jié)束后做延伸處理。長度每增
加1Kb，時(shí)間延長1分鐘。易錯(cuò)PCR循環(huán)次數(shù)決定每個(gè)核苷酸位置的突變幾率，進(jìn)而決定每個(gè)PCR產(chǎn)物可能的突變位點(diǎn)數(shù)，所以所需循環(huán)數(shù)由客戶根據(jù)需要改動(dòng)。
5.電泳檢測是否得到預(yù)計(jì)長度的PCR產(chǎn)物。
6. 克隆片段進(jìn)行功能篩選、或者克隆后進(jìn)行測序分析突變率、或者用此輪PCR的產(chǎn)物為模板，進(jìn)行下一輪的易錯(cuò)PCR。

疑難解答：
Q：現(xiàn)象：沒有PCR產(chǎn)物。
A：可能原因：一是引物沒有優(yōu)化，可以重新設(shè)計(jì)引物；二是模板DNA太少，可以增加用量；三是模板不純，zuì好先膠回收；四是溶解DNA的溶液中有EDTA，降低了PCR反應(yīng)體系的Mg離子濃度，可以適當(dāng)補(bǔ)加Mg離子。
Q：現(xiàn)象：太多的PCR條帶或PCR條帶模糊一片。
A：可能原因：一是PCR循環(huán)數(shù)太多；二是復(fù)性溫度太低；三是延伸時(shí)間太長；四是引物沒有優(yōu)化，可以重新設(shè)計(jì)引物；五是PCR條件沒優(yōu)化，可以使用touch-down PCR；六是模板有其他DNA污染；七是DNA模板質(zhì)量不高或者濃度太高。
Q：如果需要更高的突變率，如何辦？
A：可以使用連續(xù)多次易錯(cuò)PCR來提高突變率。但zuì好先用膠純化回收PCR片段,再用于下一輪易錯(cuò)PCR。此外不能用少于千分之一的次PCR產(chǎn)物作為第二輪易錯(cuò)PCR的模板，否則多樣性將受到影響。第三輪易錯(cuò)PCRzuì好使用所有第二輪的PCR產(chǎn)物作為模板，但需要在10mL體系中完成(可以分成很多100μL體系進(jìn)行)。


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