羅丹明 123是高品質(zhì)的探針標記及檢測產(chǎn)品，由北京百奧萊博供應(yīng)，本產(chǎn)品僅用于生物化學(xué)研究方面，本產(chǎn)品質(zhì)量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多羅丹明 123等探針標記及檢測產(chǎn)品請聯(lián)系我司咨詢訂購。...

特別提示：包括羅丹明 123在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：羅丹明 123
英文名稱：Rhodamine 123
產(chǎn)品貨號：KFS162
產(chǎn)品規(guī)格：5mg



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名稱：生物素標記UTP溶液(Biotin-16-UTP )
貨號：BTN151203
規(guī)格：25μL

名稱：隨機引物法DNA探針標記試劑盒
貨號：BTN90603A
規(guī)格：5次
本試劑盒是基于Feinberg和Vogelstein發(fā)明的隨機引物標記法而開發(fā)出來的即用型DNA探針標記試劑盒，標記過程由雙鏈DNA熱變性、隨機引物與單鏈DNA結(jié)合、在Klenow DNA聚合酶催化下，引物的延伸合成DNA探針并摻入標記的核苷酸三步組成，可用下面的示意圖表示：

本產(chǎn)品對Feinberg和Vogelstein經(jīng)典方法進行了改良。

產(chǎn)品特點：
1. 提供的標記反應(yīng)液整合了除酶和模板外的所有成分，簡化了反應(yīng)加樣步驟，提高了標記反應(yīng)的可重復(fù)性。
2. 使用無外切活性的Klenow exo- DNA聚合酶，已標記DNA探針不會被酶降解。
3.快速，zuì快1小時即可完成標記反應(yīng)。
4. 得到的DNA探針比活性高(如果是同位素，可以達到109cpm/μg DNA)，檢測靈敏度高。
5. 所需模版DNA量少(只需要10ng以上即可)，DNA可以是各種形狀(線狀和環(huán)狀)的、也可以是單鏈或雙鏈的，長度在100bp以上均可。
6. 得到的探針長度在200-400nt之間，可以用于Southern雜交、Northern雜交、原位雜交、菌落和斑點印跡雜交等。
7. 提供三種標記選擇，其中BTN90603A可用于各種同位素標記和其他任何非同位素標記，但需自備標記底物；BTN90603B和BTN90603C可分別用于生物素和地高xīn標記，不需自備標記底物。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
2×A型標記反應(yīng)液(自備標記物型)	50μl(僅A型有)
2×B型標記反應(yīng)液(生物素型)	50μl(僅B型有)
2×C型標記反應(yīng)液(DIG型)	50μl(僅C型有)
dATP,2mM	10μL(僅A型有)
dTTP,2mM	10μL(僅A型有)
dGTP,2mM	10μL(僅A型有)
dCTP,2mM	10μL(僅A型有)
Klenow exo-聚合酶(2U/μL)	5μl
超純水	1ml
說明書	1份

儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在一干凈的硅化的塑料離心管中加入下列成分：

成分	用量
模板DNA	50-150ng
2×標記反應(yīng)液(ABC三種之一)	10μl
超純水	補水到15μl

注意：非同位素標記物由于疏水性強，容易與常用的塑料離心管表面非特異性結(jié)合，所以一定要使用硅化的塑料離心管。模板DNA并非越多越好，因為模板會在雜交反應(yīng)中跟標記的探針雜交，競爭性地抑制探針跟靶分子的雜交。
2. 沸水浴5-10分鐘，或在PCR儀上100℃加熱5-10分鐘使DNA模版充分變性，立即放冰上待用。注意：如果PCR儀器不能設(shè)置到100℃，99℃加熱5分鐘也可。
3.高速離心數(shù)秒使所有液體集中在管底，根據(jù)試劑盒類型加入下列成份：

試劑盒類型	成分及用量
BTN90603A型	dATP、dGTP、dCTP各1μl(共3μL，濃度均為2mM) 自備的2mM dTTP/標記dUTP混合物(見注)1μL 1μl Klenow exo聚合酶
BTN90603B型	1μl Klenow exo聚合酶 4μl超純水
BTN90603C型	1μl Klenow exo聚合酶 4μl超純水

注：上表中的dTTP/標記dUTP混合物中dTTP和標記的dUTP的總濃度為2mM(在20μL體系中混合液的終濃度為0.1mM，dTTP與生物素或DIG標記的dUTP的比例zuì好為65:35)。由于空間阻礙，并非標記生物素或DIG標記的dUTP越多靈敏度越高，一般dTTP與標記dUTP的比例在65：35為zuì佳。但如果使用自備的其他標記核苷酸，如fluorescein、hydroxycoumarin、resorufin和aminoallyl標記的dUTP，則用戶需要自己摸索其與dTTP之間的zuì佳比例，如果使用32P標記的dUTP，則比活zuì好為3000Ci/mmol，濃度為好為10uCi/μL，并且不需要加入dTTP。
4. 輕柔吹打混勻。如有液滴沾在管壁上，高速離心數(shù)秒使所有液體集中在管底。
5. 37℃保溫1-20小時。標記效率跟模版量和保溫時間相關(guān)，具體見下表：

模版DNA用量	1小時后探針合成量	20小時后探針合成量
10ng	80ng	900ng
30ng	150ng	1.35μg
100ng	350ng	1.65μg
300ng	750ng	2.2μg
1μg	1.3μg	2.6μg
3μg	1.6μng	2.6μg

6. 加1μl自備的0.5M EDTA(pH8.0)終止反應(yīng)，立即放冰上待用或放-20℃保存一年。用前需要加熱100℃ 5分鐘使DNA探針變性成單鏈，然后直接加入到雜交反應(yīng)液中即可。如果電泳檢測，標記產(chǎn)物將是彌散狀態(tài)。
 注意：本方法標記核苷酸摻入率高，因此可以不經(jīng)純化直接使用。如果需要純化，注意不要用酚抽提法純化非同位素(生物素、DIG和其他等)標記的DNA探針，因為這些標記分子疏水性強，能使標記的DNA進入疏水的有機相而丟失，但可以用乙醇沉淀和Sephadex G50回收(可另購非同位素探針柱式純化試劑盒)。對比活高的同位素探針，由于其其不穩(wěn)定，因此應(yīng)該立即使用，不要長久放置。

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