PCR級(jí)甲酰胺由專業(yè)試劑供應(yīng)商北京百奧萊博提供，用于科研目的，我公司的PCR級(jí)甲酰胺品質(zhì)上佳，經(jīng)過(guò)多年的開(kāi)發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購(gòu)。...

特別提示：包括PCR級(jí)甲酰胺在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：PCR級(jí)甲酰胺
英文名稱：Formamide，PCR Grade
產(chǎn)品貨號(hào)：BTN100839
產(chǎn)品規(guī)格：250mg

本產(chǎn)品為PCR級(jí)的甲酰胺，其可以促進(jìn)某些引物、模板退火，降低帶有二級(jí)結(jié)構(gòu)的DNA的變性溫度，是一種常用的PCR增強(qiáng)劑。

儲(chǔ)存條件：低溫運(yùn)輸、-20℃保存，有效期一年。

根據(jù)您的關(guān)注的PCR級(jí)甲酰胺，您可能還對(duì)以下產(chǎn)品有需求：

貨號(hào)	名稱	規(guī)格
BTN160903	可調(diào)式易錯(cuò)PCR試劑盒	100次
BTN131181	EDTA溶液	1mL
WE0129	一步法RT-PCR試劑盒	100次
WE0158	miRNA熒光定量檢測(cè)試劑盒	125次
ALH209	KOD DNA聚合酶	250U|500U
SY0042	脫氧胞苷三磷酸溶液(100 mM)(dCTP)	400μL

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名稱：DNA Shuffling試劑盒
貨號(hào)：BTN131178
規(guī)格：10次
DNA Shuffling即DNA分子的體外同源重組，它是一種分子水平上的定向進(jìn)化(directed evolution)技術(shù)，它以一個(gè)或多個(gè)基因?yàn)槠鹗疾牧希ㄟ^(guò)先隨機(jī)斷裂成小片段，再進(jìn)行互為模板和引物的PCR(無(wú)外加引物)，zuì后再進(jìn)行常規(guī)PCR(外加引物)等處理，zuì后得到含有大量DNA重組突變的PCR產(chǎn)物。其原理示意圖如下：


產(chǎn)品特點(diǎn)：
1.即開(kāi)即用，用戶只需要提供樣品DNA模板，無(wú)需單獨(dú)準(zhǔn)備各成分。
2.操作手冊(cè)經(jīng)過(guò)優(yōu)化，1-2天即可完成，節(jié)省大量?jī)?yōu)化時(shí)間。
3.本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
PCR Mix 3.0，2×	1.5mL
DNase I溶液(1U/μL)	10μl
溶液A，10×	60μl
溶液B，10×	60μl
超純水	1mL
說(shuō)明書(shū)	1份

儲(chǔ)存條件：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限一年。

使用方法：
1.待突變基因片段的制備：待突變基因片段可以用含此基因的質(zhì)粒為模板、用PCR法或酶切法制備。制備時(shí)需保證含此基因(或此基因的一部分)的DNA片段總長(zhǎng)度不要超過(guò)1kb，同時(shí)比DNA shuffling終產(chǎn)物(第二輪PCR產(chǎn)物)長(zhǎng)200-400bp。每次DNA Shuffling實(shí)驗(yàn)至少需要2μg起始DNA片段(如果含幾個(gè)基因片段，則彼此的比例為1:1)，并且必須通過(guò)膠回收的方法回收，以便徹底去除殘留的質(zhì)粒模板、引物和非特異擴(kuò)增產(chǎn)物等。zuì后需用分光光度法準(zhǔn)確定量。
2.提前準(zhǔn)備37℃和75℃水浴，同時(shí)新鮮配制0.1U/μL的DNase工作液放冰上待用(必須在用時(shí)才配制，方法是將1μl 本試劑盒提供的1U/μL的DNase I溶液和1μl溶液A和8μl超純水混合)。此溶液需在24小時(shí)內(nèi)使用。
3.在一個(gè)離心管中，按順序加入下列成分：

成分	用量
待突變基因片段(第1步制備)	2μg
溶液A	5μl
溶液B	5μL
DNase I工作液(第2步制備)	2μL
超純水	36μL

4.充分輕柔吹打混勻后37℃水浴8分鐘，然后立即放75℃水浴處理10分鐘以滅活DNase I。
5.在2-3%瓊脂糖凝膠上電泳，用常規(guī)的膠回收法回收25-150bp范圍的所有片段待用。注意：一定要加合適的DNA marker以便確定片段范圍，zuì好使用本公司生產(chǎn)的綠如藍(lán)核酸染料(可見(jiàn)光型)作為電泳染料以避免用UV照射DNA，否則UV使DNA發(fā)生的交聯(lián)將大降低后續(xù)擴(kuò)增效果。
6.分光光度法測(cè)定回收片段的濃度。
7.在PCR管中按順序加入0.5μg上步回收得到的回收片段、50μl 2×PCR Mix、加超純水到100μl。
8.按下面的PCR反應(yīng)參數(shù)進(jìn)行輪無(wú)引物PCR：

過(guò)程	溫度	時(shí)間
PCR前變性	94℃	150s
PCR反應(yīng)(40循環(huán))	94℃	30s
	47.5℃	45s
	72℃	10s，每次循環(huán)后增加5s
PCR后延伸	72℃	10min

9.取5-10μl進(jìn)行電泳檢測(cè)，然后進(jìn)行PCR回收，得到輪PCR產(chǎn)物。
10.將回收的輪PCR產(chǎn)物1μl原液作為模板設(shè)置3管第二輪PCR反應(yīng)。

成分	用量
回收的輪PCR產(chǎn)物	1μL
PCR Mix 3.0，2×	50μL
自備DNA Shuffling引物	各1μM
超純水	加水到100μL

11.按下列PCR參數(shù)進(jìn)行第二輪PCR。

過(guò)程	溫度	時(shí)間
活化	94℃	150s
PCR反應(yīng)(25次循環(huán))	94℃	30s
	47.5℃	45s
	72℃	60s，每次循環(huán)后增加5s
PCR后延伸	72℃	10min

12.電泳檢測(cè)，回收預(yù)期大小的PCR產(chǎn)物，用于后續(xù)的構(gòu)建克隆文庫(kù)實(shí)驗(yàn)(略)。

疑難解答：
Q：易錯(cuò)PCR和DNA Shuffling有何區(qū)別？
A：前者引入的是點(diǎn)突變，后者引入的是重組突變。示意圖如下：


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