AGL1農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞是高品質(zhì)的克隆與表達(dá)產(chǎn)品，由北京百奧萊博供應(yīng)，本產(chǎn)品用于科學(xué)研究，本品質(zhì)量穩(wěn)定，價(jià)位合理，需要AGL1農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞等克隆與表達(dá)產(chǎn)品的客戶(hù)，請(qǐng)到我公司官網(wǎng)聯(lián)系我們。...

特別提示：包括AGL1農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱(chēng)：AGL1農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞
英文名稱(chēng)：AGL1 Electroporation-Competent Cell
產(chǎn)品貨號(hào)：MQ0060
產(chǎn)品規(guī)格：10×50μl/50×50μl

AGL1菌株為C58，RecA型背景，核基因中含有篩選標(biāo)簽——利福平抗性基因rif和羧芐青霉素抗性基因carb，為了便于轉(zhuǎn)化操作，此菌株攜帶一無(wú)自身轉(zhuǎn)運(yùn)功能的琥珀堿型Ti質(zhì)粒pTiBo542DT-DNA，此質(zhì)粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件，pTiBo542DT-DNA質(zhì)粒自身的T-DNA轉(zhuǎn)移功能被破壞，但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體T-DNA順利轉(zhuǎn)移)。
pTiBo542DT-DNA型Ti質(zhì)粒含有篩選標(biāo)簽：strep，賦予AGL1菌株鏈霉素抗性，適用于水稻、擬南芥、楊樹(shù)等植物的轉(zhuǎn)基因操作，開(kāi)的AGL1電轉(zhuǎn)感受態(tài)特別適用于大質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化：經(jīng)pCAMBIA2301質(zhì)粒(size:11633bp)檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá)5×104cfu/μg；經(jīng)pCAMBIA2301-ZH質(zhì)粒size:40kd)檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá)5×103cfu/μg。
保存條件：-80℃
基因型：
C58 RecA(rif R/carbR)Ti pTiBo542DT-DNA(strepR)Succinamopine
操作說(shuō)明：
1.0.2cm電擊杯和杯蓋從儲(chǔ)存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘，待其瀝干水分，正置5分鐘，使乙醇充分揮發(fā)，待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中，壓實(shí)冰面，電杯頂離冰面0.5cm以方便蓋上杯蓋，冰中靜置5分鐘充分降溫。
2.取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)插入冰中5分鐘，待其融化，加入1-5μg質(zhì)粒DNA(質(zhì)粒體積不大于6μl，zuì好用試劑盒抽提，雙蒸水溶解)，用手撥打管底混勻，立即插入冰中，用200μl槍頭將感受態(tài)-質(zhì)粒混合物快速移到電擊杯中，蓋上杯蓋，空管保留待用。
3.啟動(dòng)電轉(zhuǎn)儀，設(shè)置參數(shù)：C=25uF，PC=200ohm，V=2400V(此參數(shù)為Biorad 推薦，使用者也可按所用電轉(zhuǎn)儀推薦的protocol操作)，將電擊杯快速放入電轉(zhuǎn)槽中，電擊完成快速插入冰中，加入700μl無(wú)抗生素的LB并轉(zhuǎn)移到感受態(tài)空管中，28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時(shí)。
4.6000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天(當(dāng)平板只含有50μg/ml kan時(shí)，28℃培養(yǎng)48h即可；平板中同時(shí)加入50μg/ml kan，20μg/ml rif時(shí)，需28℃培養(yǎng)60h；如果使用的平板含有50μg/ml rif則需要28℃培養(yǎng)72-90h)。
注意事項(xiàng)：
1.感受態(tài)細(xì)胞zuì好在冰上融化。
2.混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少zuì終用于涂板的菌量。
注意事項(xiàng)：
1.加入質(zhì)粒時(shí)體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10；質(zhì)粒不純或存在鹽，乙醇等污染，轉(zhuǎn)化效率急劇下降；若轉(zhuǎn)化大質(zhì)粒或想獲得較高轉(zhuǎn)化效率，推薦使用高純質(zhì)粒提取試劑盒提取質(zhì)粒。質(zhì)粒增大一倍，轉(zhuǎn)化效率下降一個(gè)數(shù)量級(jí)。
2.混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少zuì終用于涂板的菌量。
4.利福平濃度不應(yīng)高于25μg/μl，過(guò)高的利福平濃度不利于農(nóng)桿菌生長(zhǎng)，會(huì)降低其生長(zhǎng)速度和轉(zhuǎn)化效率。本公司感受態(tài)計(jì)算轉(zhuǎn)化效率時(shí)所用平板只含有50μg/ml kan，若所用平板含有20μg/ml rif則轉(zhuǎn)化效率降低到1/2。
5.培養(yǎng)基中加入利福平的目的是防止雜菌生長(zhǎng)、篩選農(nóng)桿菌；根據(jù)所用菌株抗性加入鏈霉素或慶大霉素可防止Ti質(zhì)粒丟失，但鏈霉素不利于農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)基因操作，所以一般培養(yǎng)農(nóng)桿菌時(shí)不考慮鏈霉素或慶大霉素，Ti質(zhì)粒丟失的概率低(可以忽略)。

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