熱啟動(dòng)DNA聚合酶的品牌是百奧萊博，是優(yōu)質(zhì)的核酸擴(kuò)增(PCR)產(chǎn)品，本制品用于科研目的，本品質(zhì)量穩(wěn)定，價(jià)位合理，需要熱啟動(dòng)DNA聚合酶等核酸擴(kuò)增(PCR)產(chǎn)品的客戶，請(qǐng)到我公司官網(wǎng)聯(lián)系我們。...

特別提示：包括熱啟動(dòng)DNA聚合酶在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：熱啟動(dòng)DNA聚合酶
英文名稱：SuperStar DNA Polymerase
產(chǎn)品貨號(hào)：WE0123
產(chǎn)品規(guī)格：500U|2500U

  本產(chǎn)品是一種采用zuì新封閉技術(shù)的Taq DNA Polymerase，適用于HotStart PCR。在70℃以下，酶的活性中心被完全封閉，有效抑制了聚合酶活性，并能夠在低溫條件下有效抑制引物的非特異性退火及引物二聚體引起的非特異性擴(kuò)增。在95℃條件下孵育5分鐘后，酶的部分活性得以釋放。隨著熱循環(huán)的不斷進(jìn)行，剩余的酶活會(huì)源源不斷地釋放出來，這就使得此酶克服了常規(guī)Taq酶容易出現(xiàn)平臺(tái)期的弊端，其擴(kuò)增效率大大提高。
  本品進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)，PCR產(chǎn)物3"末端附有一個(gè)“A”堿基，可直接用于T/A克隆。本產(chǎn)品具有擴(kuò)增速度快、特異性好、穩(wěn)定性好的特點(diǎn)，主要應(yīng)用于對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物要求量大的PCR和RT-PCR反應(yīng)。

產(chǎn)品組成：

組份	500U	2500U
SuperStar DNA Polymerase，5 U/μl	100μl	5×100μl
10×PCR Buffer	1.8ml	5×1.8ml

注意：本產(chǎn)品的10×PCR Buffer中含有15 mM鎂離子。

活性定義：用活性化的大馬哈魚精子 DNA 作為模板/引物，在74℃，30分鐘內(nèi)，將10 nmol脫氧核苷酸摻入到酸性不溶物質(zhì)所需的酶量定義為1個(gè)活性單位(U)。

質(zhì)量控制：
1、經(jīng)過多次柱純化，SDS-PAGE檢測(cè)其純度大于99%；
2、經(jīng)檢測(cè)無外源核酸酶活性；
3、PCR方法檢測(cè)無宿主殘余DNA；
4、能有效地?cái)U(kuò)增人基因組中的單拷貝基因。

使用方法：
以下舉例為以人基因組DNA為模板，擴(kuò)增1 kb的片段的PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)條件，實(shí)際操作中應(yīng)根據(jù)模板、引物結(jié)構(gòu)和目的片段大小不同進(jìn)行相應(yīng)的改進(jìn)和優(yōu)化。

1、PCR反應(yīng)體系

試劑	50μl反應(yīng)體系	終濃度
10×PCR Buffer	5μl	1×
dNTP Mix，10 mM each	1μl	200μM each
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	<0.5μg	<0.5μg/50 μ l
SuperStar DNA Polymerase，5 U/μl	0.5μl	2.5 U/50μl
ddH2O	up to 50μl

注意： 可以在室溫下配制反應(yīng)液，zuì好將試劑置于冰上。引物濃度請(qǐng)以終濃度0.1-1.0μM作為設(shè)定范圍的參考。擴(kuò)增效率不高的情況下，可提高引物的濃度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí)，可降低引物濃度，由此優(yōu)化反應(yīng)體系。

2、PCR反應(yīng)條件

步驟	溫度	時(shí)間	循環(huán)數(shù)
預(yù)變性	95℃	5 min
變性	94℃	0.5-1 min	25-35個(gè)循環(huán)
退火	50-68℃	0.5-1 min
延伸	72℃	1 min
終延伸	72℃	10 min

注意：
1)一般實(shí)驗(yàn)中退火溫度比擴(kuò)增引物的熔解溫度Tm低5℃，無法得到理想的擴(kuò)增效率時(shí)，適當(dāng)降低退火溫度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí)，提高退火溫度，由此優(yōu)化反應(yīng)條件。
2)延伸時(shí)間應(yīng)根據(jù)所擴(kuò)增片段大小設(shè)定，本產(chǎn)品中所包含的SuperStar DNA Polymerase的延伸速率為1 kb/min。
3)可根據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物的下游應(yīng)用設(shè)定循環(huán)數(shù)。如果循環(huán)次數(shù)太少，擴(kuò)增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，錯(cuò)配機(jī)率會(huì)增加，非特異性背景嚴(yán)重。所以在保證產(chǎn)物得率的前提下應(yīng)盡量減少循環(huán)次數(shù)。

儲(chǔ)存條件：-20℃，避免反復(fù)凍融。

根據(jù)您的關(guān)注的熱啟動(dòng)DNA聚合酶，您可能還對(duì)以下產(chǎn)品有需求：



名稱：25mM氯化錳溶液(PCR級(jí)MnCl2溶液)
貨號(hào)：BTN130307
規(guī)格：5mL
本產(chǎn)品為專門用于易錯(cuò)PCR的MnCl2水溶液，濃度為25mM，可用于調(diào)節(jié)MnCl2的zuì佳濃度。由于Mg2+在PCR過程中可以穩(wěn)定非互補(bǔ)的堿基對(duì)，Mn2+能夠降低聚合酶對(duì)模板的特異性，因而調(diào)整兩種離子的濃度，可獲得不同突變頻率的多樣性文庫(kù)。

氯化錳分子量為125.8，CAS號(hào)為7773-01-5，水合氯化錳外觀為玫瑰色單斜晶體；無水氯化錳外觀為桃紅色結(jié)晶。密度為2.977g/cm3。熔點(diǎn)是650℃。在高于熔點(diǎn)溫度下升華。沸點(diǎn)1190℃。易溶于水，溶于醇，不溶于醚。

儲(chǔ)存條件：低溫運(yùn)輸、-20℃保存，有效期一年。

名稱：miRNA熒光定量RT-PCR檢測(cè)試劑盒
貨號(hào)：BTN131042
規(guī)格：25次
本試劑盒采用SYBR Green I 嵌合熒光染料法的原理來進(jìn)行miRNA熒光定量PCR檢測(cè)。本產(chǎn)品是專門為miRNA定量檢測(cè)而研發(fā)的新一代預(yù)混形式的熒光定量PCR檢測(cè)試劑。2×miRNA qPCR Mix包含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR增強(qiáng)劑等所有PCR所需要的成分。miRNA qPCR Mix中所含的熒光染料SYBR Green I可以與所有的雙鏈DNA結(jié)合，使該產(chǎn)品可用于不同靶序列的檢測(cè)而不需合成特異性標(biāo)記探針。其中的Taq DNA polymerase是經(jīng)化學(xué)修飾的熱啟動(dòng)酶，配合獨(dú)特的緩沖體系，使反應(yīng)特異性更好，靈敏度更高，并能在更廣的范圍內(nèi)對(duì)miRNA進(jìn)行準(zhǔn)確定量。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. 簡(jiǎn)便、快捷完成miRNA的檢測(cè)。
2. 檢測(cè)通量高，只需zuì少的RNA樣本，即可同時(shí)進(jìn)行多種目標(biāo)miRNA的檢測(cè)。
3. 檢測(cè)特異性好，獨(dú)特的miRNA引物設(shè)計(jì)技術(shù)及其優(yōu)化的反應(yīng)體系避免了非特異性擴(kuò)增、特別是Pre-miRNA的污染。
4. 檢測(cè)分辨率高：該系統(tǒng)能分辨單堿基差異的miRNA。
5. 檢測(cè)靈敏度高：可在低至pg級(jí)的總RNA中檢測(cè)到特異表達(dá)的miRNA。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
2×miRNA qPCR Mix	0.75ml
Reverse Primer(10μm)	30μl
RNase-Free Water	1ml
miRNA cDNA鏈合成試劑盒	25T
說明書	1份

儲(chǔ)存條件：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、miRNA cDNA鏈合成
請(qǐng)參見miRNA cDNA 鏈合成試劑盒產(chǎn)品使用說明書。

二、miRNA熒光定量檢測(cè)
1.室溫融化2×miRNA qPCR Mix和Reverse primer(10μm)。
2. 使用時(shí)請(qǐng)將2×miRNA qPCR Mix上下顛倒輕輕均勻混合，避免起泡，并經(jīng)短暫離心后使用。如果試劑沒有混勻，其反應(yīng)性能會(huì)有所下降。
3. 按照下表組分配制熒光定量PCR反應(yīng)體系：

試劑組份	體積
2×miRNA qPCR Mix	25μl
Forward Primer(自備)	1μl
Reverse Primer	1μl
miRNA 鏈cDNA	xμl
RNase-Free Water	至50μl

4. 建議反應(yīng)程序設(shè)置如下：

循環(huán)	溫度	時(shí)間
1×	95℃	10min
40～45×	95℃	15s
	60℃	1min
溶解曲線分析	根據(jù)PCR儀要求設(shè)定

注意事項(xiàng)：
1. miRNA 鏈cDNA的加入量不要超過Real time PCR 體積10%。
2. 對(duì)于特殊的檢測(cè)體系，高含量的cDNA 模板易導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增，根據(jù)所檢測(cè)miRNA的豐度適當(dāng)?shù)南♂宑DNA(稀釋10倍或者100倍)。
3. 2×miRNA qPCR Mix中含有SYBR Green I和ROX染料，保存本產(chǎn)品或配制PCR反應(yīng)液時(shí)應(yīng)避免強(qiáng)光照射。

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