TdT加尾法DNA生物素標(biāo)記試劑由專業(yè)試劑供應(yīng)商北京百奧萊博提供，用于科研試驗，TdT加尾法DNA生物素標(biāo)記試劑是我司眾多優(yōu)質(zhì)探針標(biāo)記及檢測之一，質(zhì)量堪比同類進(jìn)口產(chǎn)品，價格非常優(yōu)惠，目前正熱烈促銷中，恭候您的咨詢訂購。...

特別提示：包括TdT加尾法DNA生物素標(biāo)記試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：TdT加尾法DNA生物素標(biāo)記試劑盒
英文名稱：TdT-Tailing DNA Labeling Kit
產(chǎn)品貨號：BTN90605B
產(chǎn)品規(guī)格：5次

本試劑盒是基于TdT末端轉(zhuǎn)移酶能夠在DNA的3′端添加dNTP尾巴的原理而設(shè)計，該反應(yīng)的示意圖如下：


產(chǎn)品特點：
1.快速，15分鐘即可完成標(biāo)記反應(yīng)。
2. 不但可用于單鏈DNA和DNA Oligo標(biāo)記，還可用于3′突出的雙鏈DNA標(biāo)記，但后者標(biāo)記效率稍低。
3.可用同位素底物和非同位素底物(生物素和dì高辛標(biāo)記的核苷酸等)。
4. 提供不帶標(biāo)記核苷酸、帶生物素標(biāo)記核苷酸和帶dì高辛標(biāo)記核苷酸三種選擇。
5. 同時提供非標(biāo)記的dATP，用戶可以用其調(diào)節(jié)加尾長短和標(biāo)記核苷酸摻入比例。
6. 標(biāo)記的探針可用于電泳遷移率實驗(EMSA)、原位雜交(ISH)、Northern Blot(不推薦用于低豐度RNA檢測)、小RNA Northern、Southern Blot(不推薦用于單拷貝基因檢測)、菌落雜交、斑點印跡雜交分析等。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
TdT緩沖液，5×	20μl
TdT(末端轉(zhuǎn)移酶，10U/μL)	10μl
dATP，2mM	5μl
標(biāo)記核苷酸	(A、B、C不同，見注)
超純水	1ml
說明書	1份

注：A型用于自選標(biāo)記，用戶需自備標(biāo)記核苷酸，本產(chǎn)品不提供標(biāo)記核苷酸；B型提供5μl Biotin-11-dUTP；C型提供含5μl DIG-11-dUTP。

儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在0.2mL微量離心管中按下表設(shè)置一個20μl體系的標(biāo)記反應(yīng)(如果需要標(biāo)記更多探針，請增加標(biāo)記體積而不要增加探針DNA的濃度)：

成份	用量
探針DNA	100-200 pmol
TdT Buffer，5×	4μl
標(biāo)記核苷酸，1mM (A型需自備標(biāo)記核苷酸)	1μl
dATP，2mM	(見下注)
TdT末端轉(zhuǎn)移酶(10U/μL)	2μl
超純水	補到20μl

注：dATP可以不加，但這樣得到的加尾全部是標(biāo)記核苷酸，由于空間阻礙，靈敏度不一定zuì佳。如果雜交效果不好，摻入一定比例的dATP到標(biāo)記核苷酸中，以控制標(biāo)記的密度，提高比活。具體比例如何可以自己優(yōu)化。
2. 37℃反應(yīng)15分鐘，延長到30分鐘也可以。如果沒有非標(biāo)記核苷酸存在，一般可以加尾3-5個Biotin或DIG標(biāo)記的核苷酸(標(biāo)記物空間阻礙抑制延長)；如果有在加尾反應(yīng)中加入一定比例的非標(biāo)記核苷酸dATP(其他dNTP也可，只是本試劑盒只提供dATP而已)，每條探針上可加上約100個核苷酸，平均含5個標(biāo)記核苷酸
3. 70℃ 10分鐘滅活TdT酶。
4. 如果需要，可以PAGE電泳+銀染(相關(guān)試劑需要另購)檢測標(biāo)記效率，帶標(biāo)記的探針泳動速度將低于沒標(biāo)記的探針。
5. 如果是非同位素標(biāo)記，探針不需純化可以直接用于雜交。如果需要純化非同位素標(biāo)記的探針，請不要酚/lǜ仿抽提，因為非同位素標(biāo)記物一般會使探針DNA進(jìn)入有機(jī)相而丟失。
6. 使用時需將探針以1-8 ng/μL的終濃度加入到雜交液中(如果探針是雙鏈DNA，加入前還需熱變性)。如果不立即使用，非同位素標(biāo)記的探針DNA可-20℃長期放置一年，同位素標(biāo)記的探針DNA不能放置。

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名稱：酵母tRNA溶液(粗提)
貨號：BTN70904A
規(guī)格：1.5mL
本產(chǎn)品分粗體液和精提液兩種類型，濃度均為5mg/mL。A是酵母tRNA粗提液，用作制備更高純度(如分子生物級)酵母tRNA的原材料。B是精提液，是經(jīng)過本公司柱式RNAadsorp純化的分子生物學(xué)級別的酵母tRNA溶液，不含蛋白質(zhì)和DNA污染，OD260/OD280在1.9左右，可直接用作微量RNA提取和回收的助沉劑，也可以用作原位雜交、Northern雜交的封堵劑，對于探針為RNA的雜交試驗尤其適用。

儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一：以tRNA粗提液(BTN70904A)為材料，酚法制備tRNA精提液(BTN70904B)
1.在1倍體積的tRNA粗提液中加入一倍體積的自備Tris飽和酚，振蕩混勻后12000～15000g離心3分鐘得上清。
2.在上清中再加入一倍體積的自備Tris飽和酚和0.2倍體積自備的lǜ仿，振蕩混勻后12000～15000g離心3分鐘得上清。
3. 重復(fù)此步直到酚相和水相之間沒有白膜出現(xiàn)。一般需要2-4次抽提。
4.在上清中加入0.1倍體積的自備3M NaAc(pH5.2)和2倍體積的自備無水乙醇，振蕩混勻。
5. 12000～15000g離心15分鐘以上，小心移棄上清。
6. 用1mL自備 75%乙醇洗一次(即加入1mL 75%乙醇，振蕩混勻后12000～15000g離心5分鐘，小心移棄上清)。
7. 短暫離心數(shù)秒，小心移棄殘留液體，所得沉淀即是精提的酵母tRNA，可以溶解在自備的DEPC水中，UV測定其濃度，然后直接用于各種分子生物學(xué)實驗。
注意：tRNA比較短，又是單鏈，所以電泳時結(jié)合EB等染料的能力很弱，測定其濃度時zuì好不要使用電泳比較法，而要使用分光光度法。
注意：此法得率較高，但缺點是不能去除部分多糖污染，因為多糖也能在醇沉淀時沉淀下來。如果zuì后得到的溶液帶顏色，則需要用本公司柱式RNAadsorp精提，詳細(xì)過程見該產(chǎn)品使用說明書。

二：tRNA精提液(BTN70904B)作為核酸助沉劑
1.在核酸(DNA或/和RNA)溶液中，加入適當(dāng)濃度的鹽離子，鹽離子不同其終濃度也不相同，具體如下：

鹽	終濃度
NH4OAc(醋酸銨)	0.5M
NaCl(氯化鈉)	0.25M
NaOAc(醋酸鈉)	0.3M

2. 加入本產(chǎn)品使其終濃度為20μg/mL，混合均勻。
3. 加入兩倍體積的乙醇，混合均勻。
4. 冰上放置15分鐘。
5. 12000～15000g離心15分鐘以上，小心移棄上清。
6. 用1mL 75%乙醇洗一次(即加入1mL 75%乙醇，振蕩混勻后12000～15000g離心5分鐘，小心移棄上清)。
7. 短暫離心數(shù)秒，小心移棄殘留液體。
8. 將沉淀溶于適當(dāng)緩沖液中待用。
注：由于tRNA是多聚核苷酸激酶和末端轉(zhuǎn)移酶的底物，因此如果回收的DNA或RNA要用于此類反應(yīng)，就不能使用tRNA作為助沉劑。如果回收的RNA要用于RT-PCR，使用tRNA可能會對反應(yīng)的特異性產(chǎn)生干擾。

三：tRNA精提液(BTN70904B)作為雜交封堵劑
本產(chǎn)品可以作為原位雜交、Northern雜交和RNA斑點雜交的封堵劑，也可以作為Southern雜交和DNA 斑點雜交的封堵劑，但不適于作為菌斑雜交。其在雜交液或預(yù)雜交液中的終濃度為100μg/mL。
如果使用RNA探針，zuì好使用本產(chǎn)品做封堵劑，以保護(hù)RNA探針。

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