我公司致力于為客戶提供高純度、低成本的活性重組蛋白，包括單細胞全基因組PCR擴增試劑盒在內(nèi)的各類受體、細胞因子、生長因子、轉錄因子、激素、酶、毒性蛋白、病毒抗原等。...

特別提示：包括單細胞全基因組PCR擴增試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：單細胞全基因組PCR擴增試劑盒
產(chǎn)品貨號：JN0113
產(chǎn)品規(guī)格：10次

  單細胞全基因組擴增試劑盒基于多重鏈置換擴增的Phi29 DNA聚合酶等溫擴增體系，Phi29 DNA聚合酶是從Bacillus subtilis噬菌體Phi29中克隆出的嗜溫DNA聚合酶，利用基因重組技術，在大腸桿菌中進行表達后經(jīng)多次純化分離而得。Phi29 DNA聚合酶具有很強的鏈置換活性，可實現(xiàn)對DNA復雜結構的解鏈與復制。同時具有的DNA合成能力，可連續(xù)合成多達70kb的DNA片段。Phi29 DNA聚合酶具有很強的3’→5’外切酶活性，保真度高于大多數(shù)高保真酶，因此Phi29 DNA聚合酶特別適合用于全基因組擴增。
  本試劑盒可以實現(xiàn)單個細胞或者少量樣本的全基因組無差別擴增，一個反應可以達到40ug的全基因組DNA。低質量樣品會影響DNA的zuì終產(chǎn)量，如果以DNA樣品為模板，需避免使用降解的DNA作為起始模板。

產(chǎn)品組成：

組份	體積
Cell Lysis Buffer	1ml
Neutralization Buffer	1ml
Reaction Buffer	1ml
GenoPhi29 Buffer	1ml
GenoPhi29 Enzyme(10U/ul)	50ul
ddH2O	1ml

試劑盒特點：
高覆蓋度：經(jīng)過擴增后可達到95%以上覆蓋度。
高均一度：無偏好擴增，可實現(xiàn)全基因組的均一擴增。
高保真：具有很強的校正功能，保真度高。
靈敏：可實現(xiàn)從單個細胞樣本的全基因組擴增

實驗方案：
方案適用于以1-1000個新鮮配制的細胞樣品作為模板，以保證起始基因組的完整性。
1、將細胞用PBS洗滌三次。
2、取一倍體積的細胞，加入一倍體積的Cell Lysis Buffer，輕輕混勻（勿渦旋混勻）后置于冰上放置10min。
3、加入一倍體積的Neutralization Buffer，輕輕混勻，勿渦旋混勻。
4、從上述混合液中取3μL樣品，加入7μL無菌水，10μL Reaction Buffer。將20uL上述處理后的樣品加入到25uL GenoPhi29 Buffer中。
注意：如果不進行后續(xù)反應，需冰上放置。
5、加入5μL GenoPhi29 Enzyme，30℃反應3h。
注意：65℃，10min失活Phi29 DNA聚合酶。
6、擴增產(chǎn)物是高濃度基因組DNA，需要將擴增產(chǎn)物用無菌水或者TE緩沖液進行稀釋后進行下游實驗。

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貨號	名稱	規(guī)格
BTN140218	pression/BTN140218.html" target="_blank">大腸桿菌DB3.1化學感受態(tài)細胞	10*100μl
BTN140576	pression/BTN140576.html" target="_blank">大腸桿菌DH10Bac化學感受態(tài)細胞	0.1mL*10
BTN161205	pression/BTN161205.html" target="_blank">農(nóng)桿菌EHA101感受態(tài)細胞	10×100μL
BTN90801B	pression/BTN90801B.html" target="_blank">一站式TA克隆試劑盒(含感受態(tài)細胞)	20次
BTN120694	pression/BTN120694.html" target="_blank">制霉菌素溶液	10mL
YT414	pression/YT414.html" target="_blank">10% SDS水溶液	100ml

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名稱：大腸桿菌XL1-Blue化學感受態(tài)細胞
貨號：BTN90504
規(guī)格：0.1mL*10
 本產(chǎn)品是采用大腸桿菌XL1-Blue菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞，可用于DNA的化學轉化。該菌株適用于的DNA 克隆和質粒擴增，能保證高拷貝質粒的穩(wěn)定復制；適合非甲基化DNA的轉化。使用pUC19質粒檢測，轉化效率可達107。本感受態(tài)細胞具有四環(huán)素抗性。

菌株的基因型：recA1 endA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 supE44 relA1 lac[F- proAB laclqZΔ M15 Tn10(Tetr)]。

儲存條件：干冰運輸、-80℃保存，有效期半年。

自備試劑：目的DNA、SOC或LB培養(yǎng)基等。

使用方法：
1. 取感受態(tài)細胞置于冰浴中。一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100μl，可以根據(jù)實際情況分裝使用。
以下實驗以50μL感受態(tài)細胞為例。
2. 待感受態(tài)細胞融化后，向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA(根據(jù)實際情況加入適量的DNA，通常100μl感受態(tài)細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和)，用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3. 42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘。
4. 每個離心管中加入450μl 無菌的SOC或LB培養(yǎng)基(不含抗生素)，混勻后置于37℃搖床，150rpm 振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復蘇。
5. 根據(jù)實驗需求，取適量已轉化的感受態(tài)細胞，加到含相應抗生素的SOC或LB 固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時。

注意事項：
1. 涂布用量可根據(jù)具體實驗調(diào)整。若轉化的DNA 總量較多，可取少量轉化產(chǎn)物涂布平板；若轉化的DNA 總量較少，可取200-300μl轉化產(chǎn)物涂布平板。若預計的克隆數(shù)較少，可通過離心(4,000rpm，2分鐘)后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于平板中。
2. 新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。

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