無(wú)菌室實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中要注意什么？有哪些必須遵守的條件？

一、無(wú)菌室的級(jí)別：

根據(jù)空氣潔凈度的不同，無(wú)菌室可分為哪幾個(gè)級(jí)別一般情況下，無(wú)菌室的等級(jí)有百級(jí)，千級(jí)，萬(wàn)級(jí)，十萬(wàn)級(jí)，百萬(wàn)級(jí)等等。

凈化等級(jí)一般分為100級(jí)、1000級(jí)、10000級(jí)、100000級(jí)，現(xiàn)在2010年版的GMP 凈化車間已經(jīng)不用這個(gè)叫法了，分為ABCD級(jí)別，分別相對(duì)應(yīng)于98版的幾個(gè)級(jí)別，通過(guò)檢測(cè)區(qū)域內(nèi)的塵埃粒子數(shù)、浮游菌數(shù)、沉降均數(shù)評(píng)價(jià)凈化級(jí)別，各個(gè)級(jí)別 有不同的要求，凈化等級(jí)分靜態(tài)、動(dòng)態(tài)兩種。

無(wú)菌室設(shè)計(jì)建設(shè)要點(diǎn)：

無(wú)菌室內(nèi)的地面、墻壁必須平整，不易藏污納垢，便于清洗。工作臺(tái)的臺(tái)面應(yīng)該處于水平狀態(tài)。無(wú)菌室和緩沖間都裝有紫外線燈，無(wú)菌室的紫外線燈距離工作臺(tái)面 1 米。工作人員進(jìn)入無(wú)菌室應(yīng)穿滅過(guò)菌的服裝，戴帽子。

當(dāng)前無(wú)菌室多存在于微生物工廠，一般實(shí)驗(yàn)室則使用超凈臺(tái)。超凈臺(tái)其主要功能是利用空氣層流裝置排除工作臺(tái)面上部包括微生物在內(nèi)的各種微小塵埃。通過(guò)電動(dòng)裝置使空氣通過(guò)高效過(guò)濾器具后進(jìn)入工作臺(tái)面，使臺(tái)面始終保持在流動(dòng)無(wú)菌空氣控制之下。而且在接近外部的一方有一道高速流動(dòng)的氣簾防止外部帶菌空氣進(jìn)入。

在條件較困難的地方，也可以用木制無(wú)菌箱代替超凈臺(tái)。

無(wú)菌箱結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，便于移動(dòng)，箱正面開有兩個(gè)洞，不操作時(shí)用推拉式小門擋住，操作時(shí)可以將雙臂伸進(jìn)去。正面上部裝有玻璃，便于在內(nèi)部操作，箱內(nèi)部裝有紫外線燈，從側(cè)面小門可以放進(jìn)去器具和菌種等。

二、無(wú)菌室操作規(guī)范

1.無(wú)菌室應(yīng)保持清潔，嚴(yán)禁堆放雜物，以防污染。

2.嚴(yán)防一切滅菌器材和培養(yǎng)基污染，已污染者應(yīng)停止使用。

3.無(wú)菌室應(yīng)備有工作濃度的消毒液，如5%的甲酚溶液，70%的酒精，0.1%的新潔爾滅溶液，等等。

4.無(wú)菌室應(yīng)定期用適宜的消毒液滅菌清潔，以保證無(wú)菌室的潔凈度符合要求。

5.需要帶入無(wú)菌室使用的儀器，器械，平皿等一切物品，均應(yīng)包扎嚴(yán)密，并應(yīng)經(jīng)過(guò)適宜的方法滅菌。

6.無(wú)菌室使用前必須打開無(wú)菌室的紫外燈輻照滅菌30分鐘以上，并且同時(shí)打開超凈臺(tái)進(jìn)行吹風(fēng)。操作完畢，應(yīng)及時(shí)清理無(wú)菌室，再用紫外燈輻照滅菌20分鐘。

7.無(wú)菌室應(yīng)每月檢查菌落數(shù)。在超凈工作臺(tái)開啟的狀態(tài)下，取內(nèi)徑90mm的無(wú)菌培養(yǎng)皿若干，無(wú)菌操作分別注入融化并冷卻至約45℃的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約15mL，放至凝固后，倒置于30-35℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時(shí)，證明無(wú)菌后，取平板3-5個(gè)，分別放置工作位置的左中右等處，開蓋暴露30分鐘后，倒置于30-35℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時(shí)，取出檢查。100級(jí)潔凈區(qū)平板雜菌數(shù)平均不得超過(guò)1個(gè)菌落，10000級(jí)潔凈室平均不得超過(guò)3個(gè)菌落。如超過(guò)限度，應(yīng)對(duì)無(wú)菌室進(jìn)行徹底消毒，直至重復(fù)檢查合乎要求為止