業(yè)內(nèi)周知，混合穩(wěn)定細胞株具有許多不同的穩(wěn)定細胞株。因為穩(wěn)定化的整合過程常常與失活的宿主內(nèi)源基因的插入同時進行，穩(wěn)定化的混合細胞株或比較多個單克隆穩(wěn)定化的細胞株是實驗準確數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)。由此，我們淺析常見的3種穩(wěn)定細胞株篩選的發(fā)展情況。

  其一、96孔單克隆稀釋法篩選穩(wěn)定細胞株

  96孔單克隆稀釋法可用于低整合率的轉(zhuǎn)染法，或用于穩(wěn)定懸浮細胞系的單克隆細胞系和篩選實驗。該方法的優(yōu)點在于理論上可得到非常均勻的單克隆抗體，且能穩(wěn)定篩選細胞懸液，是目前篩選穩(wěn)定且高產(chǎn)率細胞株的理想方法。其缺點是工作量較大，需要大量勞動力來不斷的分板、循環(huán)篩選穩(wěn)定細胞株，已達到篩選高產(chǎn)率的穩(wěn)定性單克隆細胞的目的。

  其二、單克隆環(huán)法篩選穩(wěn)定細胞株

  單克隆環(huán)法主要用于整合率低的轉(zhuǎn)染法以及獲得單克隆細胞株。單克隆環(huán)法具有工作量小的優(yōu)點，只要把轉(zhuǎn)染體細胞按一定的細胞密度放入新的培養(yǎng)皿，用合適的藥物篩選并在培養(yǎng)皿中進行擴增，適合少量勞動力作業(yè)，其劣勢可能難以獲得高產(chǎn)率的穩(wěn)定細胞株。

  其三、逆轉(zhuǎn)錄病毒的混合克隆技術(shù)篩選穩(wěn)定細胞株

  此法可用于制備穩(wěn)定混合細胞株，其優(yōu)點在于能在短時間內(nèi)得到穩(wěn)定的細胞株，且能在任何時候?qū)⒓毎♂尦尚碌呐囵B(yǎng)皿，傾向于整合靠近轉(zhuǎn)錄始端的位點的基因，容易激活下游基因，但同時這些整合到轉(zhuǎn)錄活性基因的基因很容易導(dǎo)致整合部位基因的插入失效，影響到克隆的純度。高等細胞株中存在非整合細胞，這種混合細胞內(nèi)的細胞穩(wěn)定結(jié)合，不會失去生長的優(yōu)勢