標簽：辛基-瓊脂糖凝膠4FF 古朵生物 交聯(lián)瓊脂糖凝膠 緩沖液

  辛基-瓊脂糖凝膠4FF使用及注意事項!

  產(chǎn)品簡介：

  辛基-瓊脂糖凝膠4FF是將辛基鍵合在瓊脂糖凝膠上形成的一種可利用疏水作用來實現(xiàn)目標產(chǎn)品純化分離的中等疏水類介質(zhì)。適合各種蛋白的分離和純化。具有流速快，使用方便，應(yīng)用廣泛的特點。

  產(chǎn)品參數(shù)：

  產(chǎn)品名稱：辛基-瓊脂糖凝膠4FF(Octyl-Sepharose4FF)

  基質(zhì)：6%交聯(lián)瓊脂糖凝膠

  配基：正丁烷基n-Octyl

  配基密度：5μmol/mL

  顆粒大小：45-165μm

  大流速：600cm/h

  工作pH：3-13

  操作溫度：室溫

  使用說明：辛基-瓊脂糖凝膠4FF是一種中等疏水層析介質(zhì)，適合各種蛋白的分離和純化。

  使用方法：

  1.裝柱：

  (1)將所有的試劑和填料達到室溫.配制初始緩沖液(平衡液)和緩沖液。

  (2)根據(jù)柱子大小取所需凝膠的量，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始緩沖液(按凝膠：緩沖液=3:1比例)配成勻漿。

  (3)將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液體(液面略高于濾膜)，務(wù)必使底端無氣泡。

  (4)用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意不要使用氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。

  (5)打開蠕動泵，讓緩沖液用使用時流速的1.33倍的流速流過，使柱床穩(wěn)定。用2-3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。

  2.平衡：

  讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子，到流出液電導(dǎo)和pH不變。平衡緩沖液一般是高鹽濃度的緩沖液，如：0.02-0.05mol/L的PBS加1-2.5mol/L(NH4)2SO4等。

  3.上樣：

  (1)樣品用平衡液配制，渾濁的樣品要離心、過濾后上柱;

  (2)一般情況是讓目標產(chǎn)品結(jié)合在柱子上，用平衡洗液洗去雜質(zhì)，再選擇一種洗脫液洗下目標產(chǎn)品。

  (3)介質(zhì)對樣品組分吸附的程度取決于樣品的疏水性質(zhì)、流動相的離子強度和溫度。溫度越大、鹽濃度越高或樣品組分疏水性越強，介質(zhì)對組分吸附越牢。

  4.洗脫：

  疏水介質(zhì)可用減小鹽濃度進行洗脫。加表面活性劑或者有機溶劑可加強洗脫。常用的洗脫液是低鹽濃度緩沖液，如：0.02-0.05mol/L的PBS。

  5.再生：

  一般用低鹽濃度的緩沖液洗，洗10倍以上柱體積，接著用結(jié)合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。若有失活的蛋白或者脂類物質(zhì)在再生時洗不掉，可用在位清洗(CIP)除去。

  6.在位清洗：

  (1)對于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白，可以用2MNaCl去除。

  (2)對沉淀蛋白、以疏水作用結(jié)合的蛋白或者脂類物質(zhì)，可用1MNaOH去除。

  (3)對強疏水性結(jié)合的蛋白、脂類等，可用4-10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，但要注意有機溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產(chǎn)生氣泡。

  (4)清洗完畢后，用至少3倍柱體積緩沖液平衡柱子。

  7.去熱源：

  用0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5-6小時或者用0.1M的氫氧化鈉24小時?；蛴靡韵虏襟E去除：

  (1)2倍柱體積的70%的乙醇;

  (2)2倍柱體積50MmTris-HcLPh7.5

  (3)1倍柱體積4M尿素

  (4)3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1MNaCl;

  以上緩沖液都在無熱源的雙蒸水中配制。

  8.消毒：

  用0.5-1.0MNaOH室溫下洗8-10倍柱體積，初始緩沖液平衡柱子。

  注意事項：

  (1)密封貯存于4°C-28°C(保存溶液為20%乙醇+0.1M醋酸鈉)，通風(fēng)、干燥的地方，不能冷凍。用過的柱子貯存于4°C(20%乙醇)。

  (2)在裝柱、使用和保存柱子的時候，要避免柱子流干，氣泡進入。

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