標(biāo)簽：Ⅲ型前膠原 古朵生物 ELISA試劑盒 大鼠試劑盒

  大鼠Ⅲ型前膠原(PC III)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

  本試劑盒僅供研究使用。

  檢測范圍： 48T

  1μg/L -16μg/L

  使用目的：

  本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中Ⅲ型前膠原(PC III)含量。

  實(shí)驗(yàn)原理

  本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠Ⅲ型前膠原(PC III)水平。用純化的大鼠Ⅲ型前膠原(PC III)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入Ⅲ型前膠原(PC III)，再與HRP標(biāo)記的Ⅲ型前膠原(PC III)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的 黃色。顏色的深淺和樣品中的Ⅲ型前膠原(PC III)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠Ⅲ型前膠原(PC III)濃度。

  試劑盒組成

  1 20倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 3ml×1瓶

  2 酶標(biāo)試劑 3ml×1瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品(32μg/L) 0.5ml×1瓶

  3 酶標(biāo)包被板 12孔×4條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1瓶

  4 樣品稀釋液 3ml×1瓶 10 說明書 1份

  5 顯色劑A液 3ml×1瓶 11 封板膜 2張

  6 顯色劑B液 3ml×1/瓶 12 密封袋 1個

  標(biāo)本要求

  1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

  2.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

  操作步驟

  1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

  16μg/L 5號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

  8μg/L 4號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

  4μg/L 3號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

  2μg/L 2號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

  1μg/L 1號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

  2. 加樣：分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加 樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

  3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

  4.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

  5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

  6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

  7.溫育：操作同3。

  8.洗滌：操作同5。

  9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

  10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

  11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

  大鼠Ⅲ型前膠原(PC III)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

  計(jì)算

  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

  注意事項(xiàng)

  1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

  2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

  3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時間好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

  4.請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定，計(jì)算時請后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

  5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

  6.底物請避光保存。

  7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

  8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

  9.本試劑不同批號組分不得混用。

  10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。

  保存條件及有效期

  1.試劑盒保存：;2-8℃。

  2.有效期：6個月

  大鼠Ⅲ型前膠原(PC III)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求”的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量”的方針。