細(xì)胞培養(yǎng)基的成分有哪些?

  合成培養(yǎng)基的主要成分有：氨基酸、碳水化合物、無機鹽、維生素及其它輔助物質(zhì)。

  氨基酸

  氨基酸是組成蛋白質(zhì)的基本單位。不同種類的細(xì)胞對氨基酸的要求各異，但有幾種氨基酸細(xì)胞自身不能合成，必須依靠培養(yǎng)液提供，這幾種氨 基酸稱為必需氨基酸。其中*是細(xì)胞合成核酸和蛋白質(zhì)必需的氨基酸，在缺少*時，細(xì)胞生長不良而死亡。因此，各種培養(yǎng)液中都有 較大量的*。但是，由于*在溶液中很不穩(wěn)定，應(yīng)置于-20℃冰箱中保存，在使用前加入培養(yǎng)液內(nèi)。已含*的培養(yǎng)液在 4℃冰 箱中儲存 2 周以上時，還應(yīng)重新加入原來量的*。

  碳水化合物

  碳水化合物是細(xì)胞生長主要能量來源，其中有的是合成蛋白質(zhì)和核酸的成分。主要有葡萄糖、核糖、脫氧核糖、丙酮酸鈉和醋酸等。

  無機鹽

  培養(yǎng)液中無機鹽的主要功能是幫助細(xì)胞維持滲透壓平衡。此外，通過提供鈉，鉀和鈣離子，幫助細(xì)胞調(diào)節(jié)細(xì)胞膜功能。培養(yǎng)液的滲透壓是一個 非常重要的因素, 細(xì)胞通?？赡褪?260 mOsm/kg~320 mOsm/kg。標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)液的滲透壓在此范圍內(nèi)波動。特別注意：向培養(yǎng)液中加入其它物質(zhì) 有可能會明顯改變培養(yǎng)液的滲透壓，特別是溶于強酸或強堿中的物質(zhì)。向培養(yǎng)液中添加 HEPES 時需按以下方法調(diào)節(jié)鈉離子濃度。

  緩沖系統(tǒng)

  大多數(shù)細(xì)胞所需pH在 7.2-7.4。但是，細(xì)胞培養(yǎng)zui適pH值隨培養(yǎng)的細(xì)胞種類不同而不同。成纖維細(xì)胞喜歡較高pH (7.4-7.7)，而傳代轉(zhuǎn)化細(xì)胞 系則需要偏酸pH(7.0-7.4)。由于多數(shù)培養(yǎng)液靠*(NaHCO3)與CO2體系進(jìn)行緩沖，因此，氣相中的CO2濃度應(yīng)與培養(yǎng)液中*濃度相 平衡。如果氣相或培養(yǎng)箱空氣中CO2濃度設(shè)定在 5%，培養(yǎng)液中NaHCO3的加入量為 1.97 g/L;如果CO2濃度維持在 10%，培養(yǎng)液中NaHCO3的 加入量為 3.95 g/L。細(xì)胞培養(yǎng)瓶蓋不應(yīng)擰得太緊，以保證氣體交換。

  HEPES 是一種非離子緩沖液，在 pH 7.2-7.4 范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力，但是非常昂貴，在高濃度時對一些細(xì)胞可能有毒。HEPES 緩沖液 可與低水平的碳酸鈉(0.34 g/L)共用，以抵消因額外加入 HEPES 引起的滲透壓增加。在這種培養(yǎng)條件下，細(xì)胞培養(yǎng)瓶的蓋子應(yīng)擰緊，以防止培 養(yǎng)液中所需的少量碳酸鹽散入空氣中。大多數(shù)培養(yǎng)液中含有酚紅作為 pH 指示劑，酸性培養(yǎng)液呈橙黃色，堿性培養(yǎng)液呈深紅色。

  維生素

  在細(xì)胞培養(yǎng)中，盡管血清是維生素重要來源， 但是許多培養(yǎng)基中添加了各種維生素以適合多的細(xì)胞系生長。

  其它成分

  在一些較為復(fù)雜的培養(yǎng)液中還包括其它一些成分。如在雜交瘤技術(shù)中常用的DMEM培養(yǎng)液，使用時還需要補加丙酮酸鈉(2-Mercaptoethanol，2-Me)。2-Me對細(xì)胞生長有很重要的作用。有人認(rèn)為它相當(dāng)于胎牛血清，有直接刺激細(xì)胞增殖作用。2-Me的活性部分 是硫氫基，其中一個重要作用是使血清中含硫的化合物還原成*，能誘導(dǎo)細(xì)胞的增殖，為非特異性的激活作用。同時避免過氧化物對培養(yǎng)細(xì) 胞的損害。另一個重要作用是促進(jìn)分裂原的反應(yīng)和DNA合成，增加植物凝集素(PHA)對淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化作用，已廣泛應(yīng)用于雜交瘤技術(shù)，另外，也 開始用于一些難以培養(yǎng)的細(xì)胞。2-Me是一種小分子還原劑，極易氧化。分子量為 78.13，純的 2-Me是一種無色有刺激味的液體，比重為1.110-1.120(Do20)，常用終濃度為 5×10-5M。常配制成 0.1M的儲存液，用時每升培養(yǎng)液加 0.5ml。

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