ELISA試劑盒將出現(xiàn)假陽性結(jié)果及Elisa標(biāo)準(zhǔn)品管理詳解

  Elisa試劑盒出現(xiàn)的假陽性結(jié)果：

  ELISA檢測試劑盒屬固相免疫測定，抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例，加入板孔中的標(biāo)本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結(jié)合的機(jī)會(huì)，只有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個(gè)逐，因此需經(jīng)擴(kuò)散

  才能達(dá)到反應(yīng)的終點(diǎn)。在其后加入的酶標(biāo)記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此。這就是為什么ELISA檢測試劑盒反應(yīng)總是需要一定時(shí)間的溫育。

  溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃(冰箱溫度)等。37℃是實(shí)驗(yàn)室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度。在建立ELISA方法作反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究時(shí)，實(shí)驗(yàn)表明，兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1-2小時(shí)，產(chǎn)物的生成可達(dá)。為加速

  反應(yīng)，可提高反應(yīng)的溫度，有些試驗(yàn)在43℃進(jìn)行，但不宜采用高的溫度。抗原抗體反應(yīng)4℃為*，在放射免疫測定中多使反應(yīng)在冰箱中，以形成zui多的沉淀。但因所需時(shí)間太長，在ELISA試劑盒中一般不予采用。

  ELISA的標(biāo)準(zhǔn)品管理：

  實(shí)驗(yàn)新手在正式操作實(shí)驗(yàn)之前，需要了解學(xué)習(xí)實(shí)驗(yàn)的原理、結(jié)果等，而產(chǎn)品的正確保存也是實(shí)驗(yàn)結(jié)果因素之一。在接觸標(biāo)準(zhǔn)品之前，我們首先要掌握標(biāo)準(zhǔn)品管理的明細(xì)要求與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

  一、管理明細(xì)

  ①：應(yīng)密封存放在無霜冰箱內(nèi)，檢定菌應(yīng)存放在冰箱3～5℃之間。

  ②：標(biāo)準(zhǔn)滴定液，應(yīng)由QC主管負(fù)責(zé)人配制、標(biāo)定，定期3個(gè)月后復(fù)標(biāo)，并作好其配制，標(biāo)定和復(fù)標(biāo)的完整原始記錄。若貯存期發(fā)現(xiàn)混濁、沉淀、變色等異常情況，應(yīng)及時(shí)處理。

  二、配制質(zhì)量要求

  ①：配制不需標(biāo)定的標(biāo)準(zhǔn)液可采用分析純物質(zhì)進(jìn)行配制。其配制用水應(yīng)為符合藥典要求的純化水。

  ②：標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)滴定液必須使用基準(zhǔn)物質(zhì)。為防其存放后可能吸潮，標(biāo)定前應(yīng)干燥至恒重。

  ③：根據(jù)藥典規(guī)定：配制高氯酸滴定液時(shí)應(yīng)在常溫下進(jìn)行，使用時(shí)溫度與標(biāo)定溫差過大(不超過4℃或超過10℃以上)，應(yīng)折算或重新標(biāo)定。

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