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選擇凝膠成像系統(tǒng)的時(shí)候須注意哪些問題呢?

發(fā)布時(shí)間:2018-05-23瀏覽次數(shù):2032返回列表

凝膠成像基本由CCD相機(jī)、鏡頭、暗室和分析軟件組成,不過其功能不僅僅限于對(duì)瓊脂糖凝膠進(jìn)行成像,現(xiàn)在的成像儀趨向于多功能化,在Western Blot方面,高性能的化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)能與膠片媲美。還適用于蛋白膠、核酸、多肽、氨基酸、多聚氨基酸、印跡膜和菌落平板等應(yīng)用。那么,該如何合理選擇凝膠成像系統(tǒng)呢?選擇凝膠成像系統(tǒng)的時(shí)候須注意哪些問題呢?
一、TOCAN凝膠成像,如需直接切膠,先按系統(tǒng)中間的觀察窗,打開裝有進(jìn)口防紫外玻璃的觀察窗口,然后打開左右兩側(cè)專為割膠所設(shè)計(jì)的小門,即可進(jìn)行切膠操作。
二、三個(gè)重要的可調(diào)參數(shù)分別是焦距,聚焦和光圈。其中焦距調(diào)節(jié)清晰度,聚焦調(diào)節(jié)圖像大小,光圈調(diào)節(jié)明暗。一般先把光圈調(diào)節(jié)到適宜的亮度后,再調(diào)節(jié)聚焦將圖像放到大,后調(diào)解焦距,在圖像較大的情況下焦距比較容易調(diào)節(jié)到清晰狀態(tài),然后再把圖像縮放在適宜大小后成像即可。
三、CCD的主要技術(shù)參數(shù)有CCD尺寸,有效像素,信噪比,采集位數(shù)等。其中CCD尺寸與信噪比都是影響成像的關(guān)鍵因素,尺寸越大能接受的信號(hào)就越多。而熱噪音越低,信噪比就越高,成像質(zhì)量也就越好。采集位數(shù)指色彩灰度的表達(dá)范圍。
四、分辨率與像素值的關(guān)系。一般來(lái)講像素越多,成像也就越清晰細(xì)膩,當(dāng)然這其中還要受許多因素限制。但是高像素也不一定是好的CCD,其原因就是像素大小(PixelSize),也是很重要的因素,相同數(shù)目的像素,排列越密集,像素之間就越容易出現(xiàn)電流干擾,容易出現(xiàn)"噪點(diǎn)"等干擾成像質(zhì)量的現(xiàn)象出現(xiàn)。由于制造工藝的限制,增加尺寸,成本將會(huì)以幾何級(jí)數(shù)提高。
五、動(dòng)態(tài)范圍決定著你能否同時(shí)在一張膠上同時(shí)看到強(qiáng)的信號(hào)和弱的信號(hào),而且他們之間能保持比較好的定量關(guān)系。一般動(dòng)態(tài)范圍采用數(shù)量級(jí)來(lái)表示,這個(gè)數(shù)越大,表明動(dòng)態(tài)范圍越寬?;译A表示一種表征光亮度的方法,12bit表示從暗到亮等分為212=4096個(gè)級(jí)別,16bit即分為216個(gè)級(jí)別,可見bit值越高能分出的細(xì)微差別越大。
六、軟件功能,關(guān)注的幾個(gè)特點(diǎn):
1、軟件的基本功能:可對(duì)不同樣品,如條帶,斑點(diǎn),細(xì)菌克隆,芯片,細(xì)胞或者活體動(dòng)物等,進(jìn)行定性、定量分析,加批注,輸出圖像等操作。
2、圖像采集方式:對(duì)于化學(xué)發(fā)光或多色熒光產(chǎn)品,軟件應(yīng)具備電影模式,可以進(jìn)行圖像多禎累計(jì)功能來(lái)增強(qiáng)線性動(dòng)態(tài)范圍和數(shù)據(jù)準(zhǔn)確度。
3、曝光方式:應(yīng)采用單一曝光、多重曝光,累計(jì)曝光,延時(shí)(定時(shí))曝光多種模式可選。
4、記憶功能:軟件能記憶并自動(dòng)調(diào)用成像數(shù)據(jù),這樣你不用每次設(shè)置就能獲得重復(fù)性好的結(jié)果。
5、軟件應(yīng)配備兩套以上,使用單機(jī)版,多用戶版或網(wǎng)絡(luò)版,用戶可彼此操作,互不干擾,互不混淆。
6、操作簡(jiǎn)便,軟件應(yīng)具備操作輔助工具,使軟件操作簡(jiǎn)單易用。采用三步式泳道及條帶分析,可以快速計(jì)算蛋白質(zhì)和核酸的分子量及含量。
7、數(shù)據(jù)庫(kù)功能也是必不可少的,這樣可以檢索、分類或比較所有生成的圖像??衫貌煌娘@示算法程序圖像化顯示條帶差異。
七、制冷CCD適用的情況。對(duì)CCD噪音的降低要求很高,應(yīng)選用高分辨率數(shù)字冷卻CCD相機(jī)結(jié)合高通透鏡頭系統(tǒng),使其能夠捕獲到信號(hào)其微弱的熒光及化學(xué)發(fā)光樣品圖像,并且能夠大程度的降低噪音,減少背景,提供出色的圖像清晰度。另外可選激發(fā)光源及多位濾鏡輪擴(kuò)大了熒光/化學(xué)發(fā)光成像的應(yīng)用范圍。
八、信噪比和暗電流與CCD有的關(guān)系。通常情況下,通過降低CCD的溫度來(lái)大限度的減少暗電流對(duì)成像的影響。CCD產(chǎn)生的暗電流隨著溫度下降而減少,但是在-23℃下曲線開始趨于平緩,由此可以看出溫度并非需要無(wú)休止的降低的。所以在選擇冷CCD時(shí),溫度在-25℃(溫度,非室溫以下)下一般就可以達(dá)到您的要求了。
九、像素越高不是成像清晰,產(chǎn)品就越好。
十、CCD和CMOS在制造上的主要區(qū)別是CCD是集成在半導(dǎo)體單晶材料上,而CMOS是集成在被稱做金屬氧化物的半導(dǎo)體材料上。CCD與CMOS孰優(yōu)孰劣不能一概而論,但一般而言,普及型的數(shù)碼相機(jī)中使用CCD芯片的成像質(zhì)量要好一些。
十一、CCD的量子效率也稱像素靈敏度,指在一定的曝光量下,像素勢(shì)阱中所積累的電荷數(shù)與入射到像素表面上的光子數(shù)之比。不同結(jié)構(gòu)的CCD其量子效率差異很大。值得注意的是CCD的量子效率與入射光的波長(zhǎng)有關(guān)。動(dòng)態(tài)范圍的值越高CCD性能越好。
十二、自動(dòng)變焦鏡頭無(wú)需手動(dòng)調(diào)節(jié),可操作性強(qiáng),同時(shí)也減少了EB潛在的污染機(jī)會(huì)。再者使得將CCD內(nèi)置成為了可能,從而達(dá)到防灰防塵防震的目的,好地保護(hù)了核心部件延長(zhǎng)產(chǎn)品的使用壽命。
十三、紫外對(duì)人體,特別是眼睛有一定傷害,TOCAN凝膠成像系統(tǒng)具備紫外防護(hù)設(shè)施,在紫外燈開啟的狀態(tài)下,如不慎打開暗箱,紫外燈會(huì)自動(dòng)熄滅防止對(duì)人體的傷害。

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