凍存原代細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程
發(fā)布時(shí)間:2023-11-28瀏覽次數(shù):885返回列表
原代細(xì)胞(primary culture cell)是指從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞。有人把培養(yǎng)的第1代細(xì)胞與傳10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。原代細(xì)胞不僅廣泛應(yīng)用于分子、細(xì)胞生物學(xué)和生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究,如蛋白質(zhì)組學(xué)、基因組學(xué)、細(xì)胞株(系)研究、DNA,RNA和遺傳學(xué)研究等。
凍存原代細(xì)胞的培養(yǎng):
1.將一管細(xì)胞從液氮罐中取出,注意保護(hù)手和眼睛。
2.將凍存管快速的放入37℃水浴中,輕輕握住并旋轉(zhuǎn),直到管內(nèi)物體完全融化。
3.將凍存管立即從水浴中拿出,擦干,轉(zhuǎn)入無(wú)菌環(huán)境。
4.用70%的酒精沖洗凍存管,然后擦去多余酒精。
5.打開(kāi)蓋子,注意手指不要碰到里面的螺紋(注意,由于凍存管有負(fù)壓,開(kāi)蓋時(shí)可能會(huì)有少量溢出,這是正?,F(xiàn)象)。
6.用多聚賴氨酸包被培養(yǎng)瓶。多數(shù)細(xì)胞推薦的接種密度為每平方厘米5000個(gè)細(xì)胞。
7.蓋好培養(yǎng)瓶的蓋子,輕輕搖晃培養(yǎng)瓶以使細(xì)胞分布均勻。若需要?dú)怏w交換可打開(kāi)蓋子。
8.將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱中。
9.放入培養(yǎng)箱后第6-16小時(shí)換一次培養(yǎng)基,以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細(xì)胞。