如何提高細(xì)胞凍存成功率?
發(fā)布時(shí)間:2019-05-29瀏覽次數(shù):938返回列表
給大家講一個(gè)笑話:某小師妹跟著師兄做細(xì)胞凍存實(shí)驗(yàn),復(fù)制粘貼了每個(gè)步驟,結(jié)果復(fù)蘇的時(shí)候還是死了一大片。好笑嗎?哈哈哈,可是你們?yōu)槭裁匆薨?..
對(duì)于很多科研汪來(lái)說(shuō),細(xì)胞是zui脆弱又重要的寶貝之一,承擔(dān)著重要的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)希望。尤其是在凍存復(fù)蘇的時(shí)候,經(jīng)常會(huì)因?yàn)橐恍┬〖?xì)節(jié)導(dǎo)致問(wèn)題。比如:
風(fēng)水
出各種玄學(xué)狀況的時(shí)候,污染物是毋庸置疑的源頭,培養(yǎng)室的空氣、培養(yǎng)箱內(nèi)循環(huán)的空氣、培養(yǎng)箱的層架以及顯微鏡的載物臺(tái)和物鏡都可能是污染源。還
有就是你自己,進(jìn)入無(wú)菌間后盡量不要說(shuō)話,進(jìn)入無(wú)菌間后盡量不要說(shuō)話,進(jìn)入無(wú)菌間后盡量不要說(shuō)話。打開培養(yǎng)箱后不能說(shuō)話,打開培養(yǎng)箱后不能說(shuō)話,打開培養(yǎng)箱后不能說(shuō)話。
不要對(duì)著它念叨,要用你的心去感化細(xì)胞,重要的事情說(shuō)三遍。
溫度
慢凍快融是細(xì)胞凍存復(fù)蘇的核心關(guān)鍵詞之一。常見的是 -4℃ → -20℃ 至 - 40℃→ -80℃ → 液氮,有著嚴(yán)格的梯度降溫。
目前更多使用程序降溫盒,將細(xì)胞凍存管放于盒內(nèi),之后再置于超低溫冰箱,程序降溫盒可控制每分鐘下降1℃,一定要避免溫度原因?qū)е录?xì)胞自取滅亡;除非使用了成分經(jīng)過(guò)優(yōu)化、經(jīng)過(guò)嚴(yán)格測(cè)試的凍存液,才能免去程序降溫這個(gè)繁瑣的步驟。保存的時(shí)候也要保證整個(gè)細(xì)胞都是處于液氮的液面下方,避免溫度對(duì)細(xì)胞存活的影響。
水土
解凍后的細(xì)胞要用和以前一樣的培養(yǎng)液和血清。因?yàn)槊恳环N細(xì)胞都有自己特定的,并且已經(jīng)熟悉了的生長(zhǎng)環(huán)境。突然使用不一樣的培養(yǎng)液和血清,會(huì)造成細(xì)胞生長(zhǎng)不良,甚至死亡。這和一個(gè)人突然離家千里,會(huì)水土不服是一樣的道理。
除了操作中的各種小細(xì)節(jié),還有一個(gè)實(shí)驗(yàn)雷區(qū),就是配制細(xì)胞凍存液。常見的凍存液配制要遵循培養(yǎng)基 + 血清 + DMSO 的成分要求,根據(jù)細(xì)胞實(shí)際判斷成分配比,還建議使用程控儀,注意配制溫度,一個(gè)不小心就又會(huì)影響細(xì)胞的存活效果。所以今天,小秋給各位養(yǎng)細(xì)胞的科研汪們帶來(lái)一款細(xì)胞神器——HAKATA無(wú)血清細(xì)胞凍存液。
這是一款無(wú)血清即用型細(xì)胞凍存液,zui大的特點(diǎn)就是無(wú)需程序降溫盒及稀釋,無(wú)需分步降溫,直接使用!可在 - 80℃長(zhǎng)期保存干細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和常規(guī)細(xì)胞。冷凍細(xì)胞時(shí),用HAKATA細(xì)胞凍存液懸浮處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,不需預(yù)冷,直接 - 80℃冷凍保存,也可用液氮快速冷凍細(xì)胞; 復(fù)蘇時(shí)用恒溫箱或者水浴鍋快速?gòu)?fù)蘇細(xì)胞即可。不僅操作方便,更能提供穩(wěn)定的凍存效果,獲得更好的細(xì)胞活力。
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