T-24細(xì)胞,人膀胱癌細(xì)胞,素爾生物

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T-24細(xì)胞,人膀胱癌細(xì)胞,素爾生物 簡(jiǎn)介:
產(chǎn)品名稱:T-24
中文名稱:人膀胱癌細(xì)胞
庫(kù)存狀態(tài):現(xiàn)貨
細(xì)胞規(guī)格:株
質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn):無(wú)支原體、無(wú)污染、符合標(biāo)準(zhǔn)
運(yùn)輸方式:新鮮運(yùn)輸和凍存管運(yùn)輸
貨期:新鮮運(yùn)輸需要1-2周,凍存管運(yùn)輸?shù)男枰?-3天
T-24細(xì)胞,人膀胱癌細(xì)胞,素爾生物,質(zhì)粒的相關(guān)知識(shí):
一.如何閱讀質(zhì)粒圖譜
一步:先看 Ori 的位置,了解質(zhì)粒的類型(原核/真核/穿梭質(zhì)粒)。
第二步:再看篩選標(biāo)記,如抗性,決定使用什么篩選標(biāo)記。
--Ampr 水解β-內(nèi)酰胺環(huán),解除氨芐的毒性;
--tetr 可以阻止四環(huán)素進(jìn)入細(xì)胞;
--camr 生成氯霉素羥乙酰基衍生物,使之失去毒性;
--neor(kanr)氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶 使G418(長(zhǎng)那霉素衍生物)失活;
--hygr 使潮霉素β失活。
第三步:看多克隆位點(diǎn)(MCS)。它具有多個(gè)限制酶的單一切點(diǎn),便于外源基因的插入。如果在這些位點(diǎn)外有外源基因的插入,會(huì)導(dǎo)致某種標(biāo)志基因的失活,從而便于篩選。MCS決定了能不能放置目的基因以及如何放置目的基因。
第四步:再看外源DNA插入片段大小。質(zhì)粒一般只能容納小于10Kb的外源DNA片段。一般來(lái)說(shuō),外源DNA片段越長(zhǎng),越難插入,越不穩(wěn)定,轉(zhuǎn)化效率越低。
第五步:是否含有表達(dá)系統(tǒng)元件,即啟動(dòng)子-核糖體結(jié)合位點(diǎn)-克隆位點(diǎn)-轉(zhuǎn)錄終止信號(hào),這是用來(lái)區(qū)別克隆載體與表達(dá)載體。在克隆載體中加入一些與表達(dá)調(diào)控有關(guān)的元件即成為表達(dá)載體。選用哪種載體,要以實(shí)驗(yàn)?zāi)康臑橐罁?jù)。
二.如何選擇載體
把目的基因通過(guò)基因工程手段送到生物細(xì)胞(受體細(xì)胞),需要運(yùn)載工具(交通工具)攜帶外源基因進(jìn)入受體細(xì)胞,這種運(yùn)載工具就叫做載體(vector)?;蚬こ趟玫膙ector實(shí)際上是用來(lái)攜帶目的基因片段進(jìn)入受體細(xì)胞的 DNA。
選擇載體主要依據(jù)構(gòu)建的目的,同時(shí)要考慮載體中應(yīng)有合適的限制酶切位點(diǎn)。如果構(gòu)建的目的是要表達(dá)一個(gè)特定的基因,則要選擇合適的表達(dá)載體。
載體選擇主要考慮下述3點(diǎn):
1. 構(gòu)建DNA重組體的目的:克隆載體/表達(dá)載體。
2. 載體的類型:
克隆載體的克隆能力:根據(jù)克隆片段大?。ù筮x大,小選小)。如<10kb選質(zhì)粒。
表達(dá)載體:根據(jù)受體細(xì)胞類型:原核/真核/穿梭,E.coli/哺乳類細(xì)胞表達(dá)載體。
原核表達(dá)載體要選擇合適的啟動(dòng)子及相應(yīng)的受體菌;表達(dá)真核蛋白時(shí)需注意閱讀框錯(cuò)位問(wèn)題;表達(dá)天然蛋白和融合蛋白所需載體亦有區(qū)別。
3. 選用質(zhì)粒做載體的4點(diǎn)要求:
(1)選分子量小的質(zhì)粒,即小載體(1~1.5 kb):不易損壞,在細(xì)菌里面拷貝數(shù)也多(也有大載體);
(2)一般使用松弛型質(zhì)粒在細(xì)菌里擴(kuò)增不受約束,一般10個(gè)以上的拷貝,而嚴(yán)謹(jǐn)型質(zhì)粒<10個(gè)。
(3)必需具備一個(gè)以上的酶切位點(diǎn),有選擇的余地;
(4)必需有易檢測(cè)的標(biāo)記,多是抗生素的抗性基因。
無(wú)論選用哪種載體,先都要獲得載體分子,然后采用適當(dāng)?shù)南拗泼笇⑤d體DNA進(jìn)行切割,獲得載體片段,以便于與目的基因片段進(jìn)行連接。
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以上只是素爾生物的部分細(xì)胞產(chǎn)品,若沒(méi)發(fā)現(xiàn)您需要的產(chǎn)品請(qǐng)來(lái)電咨詢,素爾生物還提供各種菌株,血清,培養(yǎng)基,染色液,藥敏試劑,藥敏試紙,藥敏試條,基因檢測(cè),凝膠過(guò)濾填料等實(shí)驗(yàn)室用品,歡迎來(lái)電詳詢。
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