Pfu DNA聚合酶說明書

產(chǎn)品編號：BTN51207

規(guī)格：100U

產(chǎn)品及特點：

Pfu DNA Polymerase是Pyrococcus furiosis （激烈火球菌）DNA Polymerase基因在大腸桿菌中表達并經(jīng)多次過柱純化分離而得?？捎糜诟弑Ｕ鍼CR、長鏈PCR的擴增，還可以用于DNA片段的粘轉(zhuǎn)平反應。

1.它具有3’-5’聚合酶活性，跟常用的Taq DNA聚合酶一樣，能夠用于PCR反應。

2.與Taq DNA Polymerase不同的是，它還具有3’-5’外切酶活性，能糾正DNA擴增過程中產(chǎn)生的堿基錯配。

3.其出錯率zui低的是具有校正功能的耐高溫DNA Polymerase中zui低的。

4.Pfu DNA聚合酶比普通Taq DNA 聚合酶熱穩(wěn)定性更好，95℃ 1小時仍維持90％以上活性。

規(guī)格及成分：

保存條件：

低溫運輸，-20℃保存。

使用方法：

以λDNA為模板進行PCR擴增反應為例

1.按下列組份配制PCR反應液。                    

推薦50 μL PCR反應體系中模板DNA推薦使用量    

2.PCR反應條件

以λDNA為模板，擴增1 kbp的DNA片段的PCR反應條件如下：

94℃       3 min

94℃ 30 sec.     

55℃ 30 sec.        30-35cycles

72℃ 2 min.

72℃     5 min

注：PCR反應條件視模板、引物等的結(jié)構條件不同而各異。在實際操作中需根據(jù)模板、目的片段的大小、堿基序列和引物的長短等具體情況，設定zui佳的反應條件（溫度、時間等）。

注意事項:

PCR的反應液請在冰中配制，然后置于PCR反應儀上進行PCR反應。這種冷啟動法（Cool Start Method）可增強PCR擴增的特異性，減少PCR過程中的非特異性反應，能得到良好的PCR結(jié)果。

相關資料:

10×Pfu Buffer的組成

10×Pfu Buffer                            

Tris–HCl (pH8.8)                 200 mM

KCl                               100 mM

(NH₄)₂SO₄                           100 mM

MgSO₄                              500 mM

活性定義

用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物，在74℃，30分鐘內(nèi)，攝入10 nmol的全核苷酸為酸性不溶物的活性定義為1個活性單位。

質(zhì)控標準

1、SDS-PAGE 考馬市亮藍染色無雜帶污染。

2、無核酸內(nèi)切酶活性檢測（切刻酶活力）、核酸外切酶活性、核酸酶活性檢測。