加A試劑盒說明書
產(chǎn)品編號：BTN60105
規(guī)格：50T
產(chǎn)品及特點：
本產(chǎn)品利用Taq DNA polymerase 的不依賴于模板的末端轉(zhuǎn)移酶活性，在只有dATP 存在的情況下，在平末端的DNA 片段加上一個dA 尾巴，使平末端片段也能被T 載體克隆。
1. 簡單，2×Tailing Buffer 中含有所需要的所有成分,不需要單獨準(zhǔn)備。
2. 適用于任何平末端的DNA 片段，包括Pfu DNA polymerase 等酶合成的DNA 片段。
3. 產(chǎn)物可以直接用于與T 載體的連接。
格及成分：
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成分 |
規(guī)格 |
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Taq DNA polymerase (5U/μL) |
50μl |
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2×Tailing Buffer |
1ml |
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說明書 |
1份 |
保存條件：
低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。
自備試劑：
PCR 片段、超純水。
使用方法：
一：反應(yīng)前純化處理：
用Vent, Deep Vent, Pfu, Pwo 等具有3 到5 外切活性的DNA 聚合酶擴增得到的DNA片段，必須經(jīng)過徹底的去除殘留的酶的處理過程（如酚/氯fang抽提或Proteinase K處理），否則它們將在加A 反應(yīng)時，切除掉加上的A尾巴，干擾反應(yīng)?？梢圆扇∧z回收和酚/氯fang抽提法等常規(guī)方法純化，zui后溶解在水或TE 中，終濃度以0.1 μg/μL為宜。
二：加A反應(yīng)
在干凈的0.5 mL 或1.5 mL 離心管中，分別加入下列成分：
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回收的DNA片段 |
0.2-2μg |
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2×dA Tailing Buffer |
25μL |
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Taq DNA polymerase（5U/μL） |
1μL |
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補水到 |
50μL |
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72℃保溫2小時 |
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三：反應(yīng)后處理
加A反應(yīng)后，Taq DNA polymerase 將與DNA末端緊密結(jié)合，所以必須酚/氯fang抽提去除。如果使用Proteinase K處理后再用酚/氯fang抽提效果會更好。得到的DNA 溶于適量水和TE 中后即可用于T載體的連接反應(yīng)。
