植物DNA提取試劑盒說(shuō)明書
產(chǎn)品編號(hào)：BTN60602
規(guī)格：50T
產(chǎn)品及特點(diǎn)：
本產(chǎn)品是在植物DNA提取試劑盒基礎(chǔ)上開發(fā)的柱式植物基因組DNA提取產(chǎn)品，可以用于多種植物基因組DNA（含葉綠體和線粒體DNA）的快速提取。
1. 純度高，不含污染和抑制劑，可以直接用于酶切、PCR、real-time PCR、mμLtiplex PCR、RAPD、RFLP、AFLP、Southern Blotting, microsatellite analysis 等各種后續(xù)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
2. 產(chǎn)率一般在3-30 μg/100 mg 樣品。OD260/280 一般在1.8 以上。DNA 片段長(zhǎng)度一般在40-50 Kb左右。
3. 適用范圍廣，可以使用于大多數(shù)植物的各種組織。
4. 不會(huì)發(fā)生離心柱堵塞現(xiàn)象。
規(guī)格及成分：
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成分 |
規(guī)格 |
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溶液A |
40ml |
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溶液B |
20ml |
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溶液C |
50ml |
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離心吸附柱 |
50套 |
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通用洗柱液 |
50ml |
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DNA洗脫液2.0 |
10ml |
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說(shuō)明書 |
1份 |
保存條件：
常溫運(yùn)輸和保存，有效期一年。
自備試劑：
氯fang。
使用方法：
注意：溶液A 和溶液B 容易產(chǎn)生沉淀，溶液B 比較粘稠，用前均需要放置在65℃預(yù)熱使沉淀溶解、粘稠度降低，用前充分搖勻。
1. 65℃預(yù)熱柱式植物DNA提取試劑盒溶液A，待其沉淀溶化后，充分混勻，取0.75 mL加入到10 mL塑料離心管中并放置于65℃待用。
2. 稱取植物組織0.1-0.5 g左右，剪成微小的碎片，加入到有溶液A 的10 mL塑料離心管中并短暫勻漿。也可以液氮研磨后將粉末加入到管中(建議不要在陶器或玻璃研缽中破碎細(xì)胞，因?yàn)槎趸钑?huì)非特異地吸附DNA，降低DNA 回收量。但可以在塑料研缽中研磨)。勻漿過(guò)程中將產(chǎn)生大量泡沫，屬于正?，F(xiàn)象。
3. 將勻漿液(包括植物碎片)全部轉(zhuǎn)移到新的1.5 mL塑料離心管(此時(shí)勻漿液較為粘稠，可將槍頭剪去一截后轉(zhuǎn)移上清, 不能吸取的植物碎片可以小心倒入)。
4. 在勻漿液中加入0.5 倍體積預(yù)熱的溶液B 到離心管中，顛倒數(shù)次混勻。此時(shí)溶液中可能有白色絲狀懸浮物產(chǎn)生。（由于溶液B 比較粘稠，可以將1 mL槍頭剪去一截再吸?。?
5. 65℃水浴3-5分鐘。如果室溫放置，DNA 產(chǎn)量會(huì)降低10-20%。
6. 加入200 μL自備氯fang，震蕩混勻10-30 秒，此時(shí)溶液將呈乳白色。
7. 12,000 rpm 室溫離心2 分鐘。此時(shí)上清液將變得透明，中間層有白膜。小心轉(zhuǎn)移上清液到一個(gè)新的1.5 mL 塑料離心管中，避免觸及中間層的白膜。
8. 加入1.5倍體積的溶液C，顛倒混勻后全部轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，室溫放置至少2分鐘。
9. 12,000 rpm 室溫離心1 分鐘，DNA 將吸附在離心吸附柱的膜上，倒棄收集管中的穿透液。
10. 將0.5 mL通用洗柱液加入離心柱中，12,000 rpm 室溫離心1 分鐘，棄穿透液。
11. 重復(fù)上步操作一次。
12. 空甩半分鐘去除殘留液體,將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到新的1.5 mL 離心管中。
13. 將離心吸附柱放置在一新的1.5mL 塑料離心管中，加50-100μL DNA 洗脫液2.0，室溫放置3-5 分鐘。
14. 12,000 rpm 室溫離心1分鐘即得植物DNA 溶液。
15. 由于本產(chǎn)品使用的離心吸附柱吸附DNA 的能力較強(qiáng)，可以重復(fù)上步操作一次，以洗脫得到更多的DNA。
16. 直接取5-10μL 電泳檢測(cè)DNA，其余放冰箱備用。
使用效果：
圖注：用本產(chǎn)品提取0.1g牽?；ㄈ~片基因組DNA，60μL洗脫液洗脫，取15μL檢測(cè)。泳道3和4為本產(chǎn)品提取效果，泳道1和2為某公司同類產(chǎn)品提取效果。本公司提取的牽?；ㄈ~片基因組DNA 條帶清晰，產(chǎn)量高。M為本公司Marker，染料為本公司綠如藍(lán)核酸染料（BTN70909）。
