miRNA PAGE膠回收試劑盒說明書

產(chǎn)品編號：BTN70604

規(guī)格：40T

產(chǎn)品及特點：

聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)是目前分離100 nt以下的小片段RNA，尤其是20nt左右的microRNA (miRNA)分子的主要方法，但是目前市場上用于從聚丙烯酰胺凝膠中回收miRNA片段的產(chǎn)品還很少，為此百奧萊博開發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點:

1. 可以回收15-3000 nt范圍內(nèi)的各種長度的RNA，包括100 nt以下的miRNA片段。

2. 溶液A中含有百奧萊博RNA助沉劑RNADOWN，使miRNA回收率達(dá)到90%左右，3000nt的RNA的回收率達(dá)到30%左右。

3. 一站式，即開即用，操作簡單，用戶不需要自備任何試劑。

4. 擴(kuò)容性好，可小規(guī)模操作，也可以大規(guī)模操作。

5. 試劑盒含百奧萊博獨特的固相RNase清除劑，可清除工作環(huán)境中RNase的污染。

6. 儲存方便，試劑盒可以在室溫放置數(shù)月，不影響其質(zhì)量。

規(guī)格及成分：

保存條件：

常溫運輸， 4℃保存，保存期為一年。

自備試劑：

PAGE 試劑，RNA染料。

使用方法：

1. 用自備的固相RNase 清除劑對實驗所需要的物品進(jìn)行處理（見固相RNase 清除劑使用手冊）。

2. 對RNA 樣品進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳。

3. 電泳結(jié)束后用EB 或其他染料染色并確定目標(biāo)RNA 條帶的位置。

4. 用干凈的刀片切下目的條帶，置于1.5mL 塑料離心管或其他合適的塑料容器中。

5. 用吸頭擠壓凝膠塊到芝麻大小。

6. 加入1～2 倍體積的溶液A，一般的條帶加0.5 mL 即可。

7. 在搖床上室溫?fù)u晃3-5 小時（小于500nt 的片段）或12-24 小時（對1000nt以上的片段）。

8. 13000-15000g室溫離心10 分鐘，轉(zhuǎn)移上清到新的離心管。

9. 加入2 倍體積的溶液B。注意：溶液B 有沉淀，屬于正?，F(xiàn)象，用前搖晃均勻即可。

10. 上下顛倒混勻后13000-15000 g 室溫離心20-30 分鐘。

11. 小心用移液槍棄上清，回收的RNA 在管底離心面形成細(xì)小白色沉淀，注意不要吸棄此沉淀。

12. 加1mL 溶液C 到洗RNA 沉淀，顛倒搖晃數(shù)次后13000-15000g室溫離心5分鐘。

13. 小心棄上清，短暫離心半分鐘，吸盡殘留的液體。

14. 將RNA 樣品溶于適量的自備的RNase-free 水中或直接溶解在后續(xù)反應(yīng)的反應(yīng)液中，立即使用或放-70℃保存。

注意：也可以另購液相RNase 清除劑代替RNase-free 水，因為前者能抑制殘留的RNase 而RNase-free 水沒有此功能。液相RNase 清除劑與RNA 的后續(xù)反應(yīng)（如RT-PCR）兼容。